解剖生理学 实验指导书 解剖生理学课程组 山东理工大学生命科学学院 二0一七年二月
解剖生理学 实验指导书 解剖生理学课程组 山东理工大学生命科学学院 二 O 一七年二月
实验一AB0血型鉴定 【实验目的】 1.学习辨别血型的方法。 2.观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理 3.通过实验认识血型鉴定在输血中的重要性。 【实验原理】 血型的分型是依据红细胞膜上存在的特异性抗原（凝集原）来确定的。如含某种凝集原的红细胞与 含相应凝集素的血清相通，会产生凝集现象，从而危机生命，因此，临床上在输血前必须注意鉴定血型， 以确保安全输血。血型鉴定是用己知的标准血清的抗体，既A型标准血清含抗B,B型标准血清含抗 A,去测定受试者红细胞膜上未知的抗原，根据是否发生红细胞凝集反应来确定血型。 【实验对象】人。 【实验器材】 消毒采血针、玻片、消毒牙签、标准抗A和抗B血清、生理盐水、5%乙醇、消毒棉球、显微镜。 【实验步骤和观察项目】 A形标准血清B烈标准血清 1.取清洁玻片两块，分别标明“抗A”和“抗B (可用钢笔或结种色竿标记)。 2.将标准抗A和抗B血清各一滴，分别滴在相应 玻片上的中央处。 3.用75%乙醇的棉球消毒指端或耳垂，用消毒采 血针刺破皮肤取血。 4.用消毒牙签沾血少许与标准抗A血清充分混合， 用另一根消毒牙签沾血与标准抗B血清充分混合。也可 取1~3滴血置入盛有1ml生理盐水的小试管中混匀， 制成红细胞混悬液，备供取用。 5.10~15min后用肉眼观察有无凝集现象，根据 有无凝集现象来判断血型（图3-1）。 【注意事项】 图3-1AB0血型检查结果判图 1.实验用具严格消毒，请勿污染，消毒采血针应一人一针。 2。牙签沾取血液切勿过多，以防止在血清中形成团块，影响判断结果 3.分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌。 4.注意区别凝集现象与红细胞叠连。发生红细胞凝集时，肉眼观察呈朱红色颗粒，且液体变得清亮。 【思考题】 1.根据自己的血型，说明你能接受和输血给何种血型的人，为什么？ 2.如何区别血液的凝集与凝固，其机理是否一样？
2 实验一 ABO 血型鉴定 【实验目的】 1．学习辨别血型的方法。 2．观察红细胞凝集现象，掌握 ABO 血型鉴定的原理。 3．通过实验认识血型鉴定在输血中的重要性。 【实验原理】 血型的分型是依据红细胞膜上存在的特异性抗原（凝集原）来确定的。如含某种凝集原的红细胞与 含相应凝集素的血清相遇，会产生凝集现象，从而危机生命，因此，临床上在输血前必须注意鉴定血型， 以确保安全输血。血型鉴定是用已知的标准血清的抗体，既 A 型标准血清含抗 B ，B 型标准血清含抗 A ，去测定受试者红细胞膜上未知的抗原，根据是否发生红细胞凝集反应来确定血型。 【实验对象】 人。 【实验器材】 消毒采血针、玻片、消毒牙签、标准抗 A 和抗 B 血清、生理盐水、75%乙醇、消毒棉球、显微镜。 【实验步骤和观察项目】 1．取清洁玻片两块，分别标明“抗 A”和“抗 B” （可用钢笔或特种色笔标记）。 2．将标准抗 A 和抗 B 血清各一滴，分别滴在相应 玻片上的中央处。 3．用 75%乙醇的棉球消毒指端或耳垂，用消毒采 血针刺破皮肤取血。 4．用消毒牙签沾血少许与标准抗 A 血清充分混合， 用另一根消毒牙签沾血与标准抗 B 血清充分混合。也可 取 1～3 滴血置入盛有 1ml 生理盐水的小试管中混匀， 制成红细胞混悬液，备供取用。 5．10～15min 后用肉眼观察有无凝集现象，根据 有无凝集现象来判断血型（图 3-1）。 【注意事项】 图 3-1 ABO 血型检查结果判断 1． 实验用具严格消毒，请勿污染，消毒采血针应一人一针。 2． 牙签沾取血液切勿过多，以防止在血清中形成团块，影响判断结果。 3． 分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗 A 血清和抗 B 血清中搅拌。 4．注意区别凝集现象与红细胞叠连。发生红细胞凝集时，肉眼观察呈朱红色颗粒，且液体变得清亮。 【思考题】 1.根据自己的血型，说明你能接受和输血给何种血型的人，为什么？ 2.如何区别血液的凝集与凝固，其机理是否一样？
实验二反射弧分析、反射时测定及搔扒反射的观察 【实验目的要求】 1。掌握脊蛙的制备方法。 2.分析反射弧的组成，并探讨各部分对反射活动的作用。 3.掌握测量反射时的方法，了解刺激强度与反射时的关系。 【实验原理】 神经调节的基本方式为反射。反射是指在中板神经系统参与下，机体对内、外环境变化所作出的 规律性反应。反射分为条件反射和非条件反射。 反射的结构基础是反射弧，由感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器五部分组成。在 自然条件下，反射活动一般都需经过完整的反射弧来实现，如果反射弧中任一环节中断（解剖结构受 到破坏或生理功能受到抑制)，则反射不能发生。较复杂的反射需要较高级中枢部位的整合，而一些较 简单的反射，只需通过中枢神经系统的低级部位就能完成。如将动物的高位中枢切除，而仅保留脊髓 的动物称为脊动物（脊蛙、脊猫），此时动物产生的各种反射活动为单纯的脊髓反射。与高位中枢离断 的脊髓，在手术后暂时丧失反射活动的能力，进入无反应状态，这种现象称为脊休克。 从刺激开始至反射出现所需要的时间，也就是反射通过反射弧的时间，称为反射时（或称潜伏期）， 即兴奋通过反射弧而引起外周效应所需要的时间。在一定的条件下和一定的刺激强度范围内，刺激越 强，反射时越短：刺激越弱，反射时越长。 【实验对象】 蟾蜍。 【实验材料与器械】 两柄类手术器械一套、铁支架（带铁夹）入、蛙嘴夹、蛙腿夹、蛙板、铜锌弓、玻璃分针、刺激电极、 棉球、纱布、医用缝合线、小滤纸（约1cm×1cm)、滴管、培养皿、烧杯、秒表：任氏液、0.5%硫酸 1%硫酸、清水、2%普鲁卡因。 【实验方法与步骤】 (一)制备脊塘蜍 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净，用布包裹蟾蜍四肢躯干露出头部。用左手握住蟾蜍，并用食指 按压头部前端，拇指按压背部，使头部前俯：右手持金属探针由头前端沿中线向尾方划触、触及凹陷 处即枕骨大孔的所在。将探针由凹陷处垂直刺入，刺破皮肤即入枕骨大孔，这时将探针尖端转向头方 向前探入顿腔内，然后向各方搅动探针，以捣毁脑组织。如探针确在顿腔内，术者可感觉出针在四面 皆壁的腔内。 (二)脊蟾蜍的处理 用蛙嘴夹夹住脊蝙蜍下颌，悬挂于支架上，用烧杯内清水浸洗蟾蜍，用纱布擦去水滴，但使皮肤 保持湿润。刚手术的脊蟾蜍，因切断了脑和脊髓的联系，脊髓失去来自大脑高级部位调节性的影响， 立即进入休克状态。待其安静5~l0mi后，由于脊髓本身的机制发挥作用，脊髓反射逐渐出现。 (三)反射时的测定 1.用蛙嘴夹夹住脊蟾蜍下颌，悬挂于支架上。 2.屈反射和反射时的测定 将蟾蜍左后肢的最长趾浸入0.5%硫酸溶液（培养皿中）中2-3mm(浸 入时间不超过10s),立即记下时间。当出现屈肌反射时，则停止计时，此为屈肌反射时。立即用清水冲 洗受刺激的皮肤并用纱布擦干。重复测定屈肌反射时3次，求出平均值作为左右后肢最长趾的反射时。 3
3 实验二 反射弧分析、反射时测定及搔扒反射的观察 【实验目的要求】 1．掌握脊蛙的制备方法。 2．分析反射弧的组成，并探讨各部分对反射活动的作用。 3．掌握测量反射时的方法，了解刺激强度与反射时的关系。 【实验原理】 神经调节的基本方式为反射。反射是指在中枢神经系统参与下，机体对内、外环境变化所作出的 规律性反应。反射分为条件反射和非条件反射。 反射的结构基础是反射弧，由感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器五部分组成。在 自然条件下，反射活动一般都需经过完整的反射弧来实现，如果反射弧中任一环节中断（解剖结构受 到破坏或生理功能受到抑制），则反射不能发生。较复杂的反射需要较高级中枢部位的整合，而一些较 简单的反射，只需通过中枢神经系统的低级部位就能完成。如将动物的高位中枢切除，而仅保留脊髓 的动物称为脊动物（脊蛙、脊猫），此时动物产生的各种反射活动为单纯的脊髓反射。与高位中枢离断 的脊髓，在手术后暂时丧失反射活动的能力，进入无反应状态，这种现象称为脊休克。 从刺激开始至反射出现所需要的时间，也就是反射通过反射弧的时间，称为反射时（或称潜伏期）， 即兴奋通过反射弧而引起外周效应所需要的时间。在一定的条件下和一定的刺激强度范围内，刺激越 强，反射时越短；刺激越弱，反射时越长。 【实验对象】 蟾蜍。 【实验材料与器械】 两栖类手术器械一套、铁支架（带铁夹）、蛙嘴夹、蛙腿夹、蛙板、铜锌弓、玻璃分针、刺激电极、 棉球、纱布、医用缝合线、小滤纸（约 1cmх1cm）、滴管、培养皿、烧杯、秒表；任氏液、0.5%硫酸、 1%硫酸、清水、2%普鲁卡因。 【实验方法与步骤】 （一）制备脊蟾蜍 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净，用布包裹蟾蜍四肢躯干露出头部。用左手握住蟾蜍，并用食指 按压头部前端，拇指按压背部，使头部前俯；右手持金属探针由头前端沿中线向尾方划触、触及凹陷 处即枕骨大孔的所在。将探针由凹陷处垂直刺入，刺破皮肤即入枕骨大孔，这时将探针尖端转向头方， 向前探入颅腔内，然后向各方搅动探针，以捣毁脑组织。如探针确在颅腔内，术者可感觉出针在四面 皆壁的腔内。 （二）脊蟾蜍的处理 用蛙嘴夹夹住脊蟾蜍下颌，悬挂于支架上，用烧杯内清水浸洗蟾蜍，用纱布擦去水滴，但使皮肤 保持湿润。刚手术的脊蟾蜍，因切断了脑和脊髓的联系，脊髓失去来自大脑高级部位调节性的影响， 立即进入休克状态。待其安静 5～10min 后，由于脊髓本身的机制发挥作用，脊髓反射逐渐出现。 （三）反射时的测定 1．用蛙嘴夹夹住脊蟾蜍下颌，悬挂于支架上。 2．屈反射和反射时的测定 将蟾蜍左后肢的最长趾浸入 0.5%硫酸溶液（培养皿中）中 2-3mm(浸 入时间不超过 10s)，立即记下时间。当出现屈肌反射时，则停止计时，此为屈肌反射时。立即用清水冲 洗受刺激的皮肤并用纱布擦干。重复测定屈肌反射时 3 次，求出平均值作为左右后肢最长趾的反射时
用同样方法测定右左后肢最长趾的反射时。 3.同法用1%硫酸溶液分别刺激同一后肢最长趾各3次。注意每次用硫酸刺激后都要用水冲洗并用 纱布擦干最长趾。 4.搔扒反射和反射时的测定将浸有硫酸的滤纸片，贴于蟾蜍一侧背部或腹部皮肤上，可见四肢皆 向此处搔扒，直至除去滤纸片为止，即为搔扒反射：从滤纸片贴于蟾蜍背部皮肤时起至其后肢开始除去 纸片所需的时间，即为搔抓反射的反射时。 将一浸有1%硫酸溶液的滤纸片，贴于蟾蜍右侧背部或腹部皮肤上，开始计时：当右后肢刚开始提起 时，停止计时。重复3次，取反射时平均值 (四)反射弧的组成分析 反射活动的结构基础是反射弧。通过实验证明反射弧的组成及反射弧各部分的作用。 1.用培养皿盛0.5%硫酸溶液分别刺激蟾蜍两左后肢的最长趾趾端（刺激时间和范围应保持恒定）， 均出现屈肌反射，之后立即用清水冲洗受刺激的皮肤并用纱布擦干。 2去右后肢踝关节以下皮肤 (1)用手术剪自右后肢最长趾基部环切皮肤，然后再用手术镊剥净长趾上的皮肤。用0.5%硫酸刺 激去皮的长趾，观察是否出现反射，分析原因，洗净刺激部位。 (2)用小滤纸片浸1%硫酸贴在蟾蜍右侧背部或腹部皮肤上，观察此侧小腿是否能出现反射活动， 分析原因。 (3)将一浸有1%硫酸的滤纸片贴在蟾蜍左后肢的皮肤上，观察左后，甚至右后肢屈肌反射情况， 分析原因。 3.麻醉坐骨神经 (1)分离坐骨神经将脊蟾蜍腹位固定于蛙板上，剪开左侧大腿背部皮肤，分离肌肉（股二头肌 和半膜肌)和结缔组织，暴露坐骨神经，在神经下穿一条丝线，用线将神经提起。用浸有普鲁卡因或 利多卡因溶液细棉条包住分离出的坐骨神经，重新将脊蟾蜍下悬挂支架上。 (2)测屈反射消失的时间：从给药麻醉坐骨神经开始计时，每隔2mi将蟾蜍的左后肢的最长趾 浸入0.%硫酸溶液中，观察有无屈肌反射（记录加药时间），直至测屈反射不再出现，停止计时。为什 么测屈反射不再出现？ (3)测搔扒反射消失的时间：当屈肌反射刚刚不能出现时（记录时间），立即将一浸有1%硫酸溶液 的滤纸片，贴于蟾蜍左侧背部或腹部皮肤上，每隔2mi重复一次，直至搔扒反射不再出现（记录时间）。 记录加药至屈反射消失的时间及加药至搔扒反射消失的时间，并记录反射时的变化。 3毁脊髓用镊子夹住右后肢，观察该侧屈肌反射情况，★为何要做此检测？取下脊蟾蜍，去掉棉条， 清水清洗蟾蜍身体后，用探针插入脊椎管破坏脊髓之后，观察屈肌反射和搔扒反射是否还存在，分析原 因。 【注意事项】 1.毁脑时不可伤及脊髓，以免破坏脊髓反射中枢 2.分离坐骨神经应尽量向上，并尽量剪断与其相连的分支。 3。浸入硫酸溶液的部位应限于一个趾尖，每次浸泡范围也应恒定切勿浸入太多。 4.每次酸刺激后应立即用清水洗净脚趾，并用纱布措干，以保护皮肤并防止冲淡硫酸溶液。 5.剥脱脚趾皮肤要完全，若剩留少量皮肤会影响实验结果。 4
4 用同样方法测定右左后肢最长趾的反射时。 3．同法用 1%硫酸溶液分别刺激同一后肢最长趾各 3 次。注意每次用硫酸刺激后都要用水冲洗并用 纱布擦干最长趾。 4．搔扒反射和反射时的测定 将浸有硫酸的滤纸片，贴于蟾蜍一侧背部或腹部皮肤上，可见四肢皆 向此处搔扒，直至除去滤纸片为止，即为掻扒反射；从滤纸片贴于蟾蜍背部皮肤时起至其后肢开始除去 纸片所需的时间，即为掻扒反射的反射时。 将一浸有 1%硫酸溶液的滤纸片，贴于蟾蜍右侧背部或腹部皮肤上，开始计时；当右后肢刚开始提起 时，停止计时。重复 3 次，取反射时平均值。 （四）反射弧的组成分析 反射活动的结构基础是反射弧。通过实验证明反射弧的组成及反射弧各部分的作用。 1.用培养皿盛 0.5%硫酸溶液分别刺激蟾蜍两左后肢的最长趾趾端（刺激时间和范围应保持恒定）， 均出现屈肌反射，之后立即用清水冲洗受刺激的皮肤并用纱布擦干。 2.去右后肢踝关节以下皮肤 （1）用手术剪自右后肢最长趾基部环切皮肤，然后再用手术镊剥净长趾上的皮肤。用 0.5%硫酸刺 激去皮的长趾，观察是否出现反射，分析原因，洗净刺激部位。 （2）用小滤纸片浸 1%硫酸贴在蟾蜍右侧背部或腹部皮肤上，观察此侧小腿是否能出现反射活动， 分析原因。 （3）将一浸有 1%硫酸的滤纸片贴在蟾蜍左后肢的皮肤上，观察左后，甚至右后肢屈肌反射情况， 分析原因。 3.麻醉坐骨神经 （1）分离坐骨神经 将脊蟾蜍腹位固定于蛙板上，剪开左侧大腿背部皮肤，分离肌肉（股二头肌 和半膜肌）和结缔组织，暴露坐骨神经，在神经下穿一条丝线，用线将神经提起。用浸有普鲁卡因或 利多卡因溶液细棉条包住分离出的坐骨神经，重新将脊蟾蜍下悬挂支架上。 （2）测屈反射消失的时间：从给药麻醉坐骨神经开始计时，每隔 2min 将蟾蜍的左后肢的最长趾 浸入 0.5%硫酸溶液中，观察有无屈肌反射(记录加药时间)，直至测屈反射不再出现，停止计时。为什 么测屈反射不再出现？ （3）测掻扒反射消失的时间：当屈肌反射刚刚不能出现时(记录时间)，立即将一浸有 1%硫酸溶液 的滤纸片，贴于蟾蜍左侧背部或腹部皮肤上，每隔 2min 重复一次，直至搔扒反射不再出现(记录时间)。 记录加药至屈反射消失的时间及加药至搔扒反射消失的时间，并记录反射时的变化。 3.毁脊髓 用镊子夹住右后肢，观察该侧屈肌反射情况，★为何要做此检测?取下脊蟾蜍，去掉棉条， 清水清洗蟾蜍身体后，用探针插入脊椎管破坏脊髓之后，观察屈肌反射和搔扒反射是否还存在，分析原 因。 【注意事项】 1．毁脑时不可伤及脊髓，以免破坏脊髓反射中枢。 2．分离坐骨神经应尽量向上，并尽量剪断与其相连的分支。 3．浸入硫酸溶液的部位应限于一个趾尖，每次浸泡范围也应恒定切勿浸入太多。 4．每次酸刺激后应立即用清水洗净脚趾，并用纱布揩干，以保护皮肤并防止冲淡硫酸溶液。 5．剥脱脚趾皮肤要完全，若剩留少量皮肤会影响实验结果
【思考题】 1.运用所得到的现象，通过严格的推理来分析后肢屈反射的反射弧构成。 2.屈反射和抓反射的皮肤感受有何不同？ 3.分析刺激强度和反射时的关系，如果实验中开始测定的反射时很长，并且有缩短趋势，可能时什 么原因？ 4.比较从给药到屈反射消失和给药到搔扒反射的反射时，说明什么？
5 【思考题】 1．运用所得到的现象，通过严格的推理来分析后肢屈反射的反射弧构成。 2．屈反射和抓反射的皮肤感受有何不同？ 3．分析刺激强度和反射时的关系，如果实验中开始测定的反射时很长，并且有缩短趋势，可能时什 么原因？ 4．比较从给药到屈反射消失和给药到搔扒反射的反射时，说明什么？