川六华西医院 4.荧光寿命 定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度时所 用的时间。 >各种荧光物质的荧光寿命不同 时间分辨荧光免疫测定 延迟测定—消除短寿命荧光干扰
➢ 定义： 荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度时所 用的时间。 ➢ 各种荧光物质的荧光寿命不同 —— 时间分辨荧光免疫测定 4. 荧光寿命 延迟测定——消除短寿命荧光干扰
川六华西医院 5.荧光淬灭 定义:荧光物质在某些理化因素的作用下,发射荧光减弱甚 至消退的现象称为荧光淬灭。 理化因素:紫外线照射、高温、苯胺、硝基苯、酚、碘等。 ·注意避免,保护荧光;利用荧光淬灭剂消除非特异性荧光
5. 荧光淬灭 • 定义：荧光物质在某些理化因素的作用下，发射荧光减弱甚 至消退的现象称为荧光淬灭。 • 理化因素：紫外线照射、高温、苯胺、硝基苯、酚、碘等。 • 注意避免，保护荧光；利用荧光淬灭剂消除非特异性荧光
川六华西医院 6.荧光偏振 Fu+F L P=0完全不偏振 1<P<1部分偏振 P偏振度 FH激发光起偏器∥荧光检偏器透射轴时的荧光强度 1激发光起偏器荧光检偏器透射轴时的荧光强度
6. 荧光偏振 P = FH - FL FH + FL P 偏振度 FH 激发光起偏器 // 荧光检偏器透射轴 时的荧光强度 FL 激发光起偏器 ┻ 荧光检偏器透射轴 时的荧光强度 P = 0 完全不偏振 -1 < P <1 部分偏振
川六华西医院 荧光物质一类能产生明显荧光的有机化合物 名称 最大发射波长 最大吸收波长nm)(nm) 荧光颜色 应用 异硫氰酸荧光 素(FTc) 490~495 520-530 亮黄绿色最广泛 四乙基罗丹明 570 595~600 (RB200) 橘红色常用于双重标记或对比 染色,但荧光效率较低 四甲基异硫氰 酸罗丹明 550 620 橙红色衬染或单独染色荧光淬 (TRITC) 与FTC一起用于双色免 藻红蛋白(PE) 565 578 藻红色疫荧光染色共用 (488,75%) 488nm波长
荧光物质 一类能产生明显荧光的有机化合物 名 称 最大吸收波长(nm) 最大发射波长 (nm) 荧光颜色 应 用 异硫氰酸荧光 素(FITC) 490~495 520~530 亮黄绿色 最广泛 四乙基罗丹明 (RB200) 570 595~600 橘红色 常用于双重标记或对比 染色，但荧光效率较低 四甲基异硫氰 酸罗丹明 (TRITC) 550 620 橙红色 衬染或单独染色,荧光淬 灭速度慢 藻红蛋白(PE) 565 (488, 75%) 578 藻红色 与FITC一起用于双色免 疫荧光染色,共用 488nm波长
川六华西医院 其他荧光物质 老钢系合物铂()铖(B)等 激发光谱宽,发射光谱窄,荧光衰变时间长,适用于时 间分辨荧光免疫测定 酶作用后产生荧光的物质 如:4甲基伞酮βD半乳糖苷 β-半乳糖苷酶 4甲基伞酮 激发波长360nm发射光波长450nm
其他荧光物质 镧系螯合物 铕（Eu3+）、铽（Tb3+）等 酶作用后产生荧光的物质 如: 4甲基伞酮-β-D半乳糖苷 β-半乳糖苷酶 4甲基伞酮 激发波长 360nm 发射光波长 450nm 激发光谱宽，发射光谱窄，荧光衰变时间长，适用于时 间分辨荧光免疫测定