2.TEM的分辨本领与有效放大倍数 电子枪 ·电子显微镜分辨率可达 聚光镜 0.2nm 样品 ·电镜的分辨本领是指电 物镜 镜处于最佳状态下的分 中间镜 辨率 投影镜 荧光屏成像
2．TEM的分辨本领与有效放大倍数 • 电子显微镜分辨率可达 0.2 nm • 电镜的分辨本领是指电 镜处于最佳状态下的分 辨率
3.TEM的基本构造 电子光学系统（镜 筒)：照明系统； 样品室； 电子枪 电子枪 ·成像放大系统：观 聚光镜 察记录系统。 聚光镜 样品 真空系统：泵；控 物镜 样品室 制管道和阀门；真 物镜 中间镜 空测试装置。 中间镜 投影镜 ·电路系统：高压发 投影镜 生器；稳压、稳流 观察窗 电路；自动控制电 荧光屏 荧光屏成像 B 路
3．TEM的基本构造 • 电子光学系统（镜 筒）：照明系统； 样品室； • 成像放大系统；观 察记录系统。 • 真空系统：泵；控 制管道和阀门；真 空测试装置。 • 电路系统：高压发 生器；稳压、稳流 电路；自动控制电 路
4.TEM的工作原理 电子枪的阴极通电加热到一定温度后，发射电子，由于阴 阳极之间有很高的电位差（约-10万伏），引起了电子的 快速流动，形成了一束强的照明电子流。经阳极孔的汇聚 ,形成了一束很细的但密度很高的电子流，经磁透镜的会 聚，打在样品片上。高速的电子与样品中原子的电子发生 碰撞，发生散射，散射角小的电子与透射电子参与成像， 它们经过物镜、中间镜、投影镜的逐级发散、放大，最后 投射到荧光屏上。由于切片中各部分的密度有差异，透过 切片的电子就有了疏密之别，电子激发荧光物质所产生的 荧光就有了强弱之别
• 电子枪的阴极通电加热到一定温度后，发射电子，由于阴 阳极之间有很高的电位差（约-10万伏），引起了电子的 快速流动，形成了一束强的照明电子流。经阳极孔的汇聚 ，形成了一束很细的但密度很高的电子流，经磁透镜的会 聚，打在样品片上。高速的电子与样品中原子的电子发生 碰撞，发生散射，散射角小的电子与透射电子参与成像， 它们经过物镜、中间镜、投影镜的逐级发散、放大，最后 投射到荧光屏上。由于切片中各部分的密度有差异，透过 切片的电子就有了疏密之别，电子激发荧光物质所产生的 荧光就有了强弱之别。 4．TEM的工作原理
5.透射电镜制样技术 超薄切片技术 取材 固定 包埋 切片 染色 观察 环氧树脂 刀片 包埋块 固定 脱水 包埋 戊二醛和 清洗后用系列梯度 丙酮或乙醇浸泡 置温箱中聚合 修块 四氧化锇 铜网与支持膜 样品水槽 黑白图像 染色 电镜观察 玻璃刀 超薄切片 切片 3mm 重金属盐 收集切片于载网上 厚度40-50nm
5. 透射电镜制样技术——超薄切片技术 戊二醛和 四氧化锇 环氧树脂 厚度40-50nm 超薄切片 重金属盐 黑白图像 铜网与支持膜
超薄切片技术显示的细胞超微结构 应用超薄切片技术，几乎可以观察各种细胞的超微结构 重金属盐颜色 (正染) cell wall Golgi stack nucleus mitochondrion ribosomes 100nm Figure 9-45 Molecular Biology of the Cell(Garland Science 2008)
超薄切片技术显示的细胞超微结构 • 应用超薄切片技术，几乎可以观察各种细胞的超微结构 • 重金属盐颜色 （正染） Figure 9-45 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)