Pull-down优缺点 口灵敏、周期短 ▣采用纯化蛋白进行实验即可鉴定直接相互 作用 ▣需要表达纯化蛋白 ▣体外相互作用，存在假阳性或假阴性
Pull-down优缺点 灵敏、周期短 采用纯化蛋白进行实验即可鉴定直接相互 作用 需要表达纯化蛋白 体外相互作用，存在假阳性或假阴性
DNA Pull-down实验 口应用：主要用于筛选鉴定与目的DNA片段相 互作用的蛋白质（如转录因子类） ▣方法：与蛋白相互作用的pull-down类似， 只是固定于色谱柱或磁珠上的为标记的DNA 片段，其他步骤一样 ▣优缺点：操作简便、周期短、存在假阳/阴 性
DNA Pull-down实验 应用：主要用于筛选鉴定与目的DNA片段相 互作用的蛋白质（如转录因子类） 方法：与蛋白相互作用的pull-down类似， 只是固定于色谱柱或磁珠上的为标记的DNA 片段，其他步骤一样 优缺点：操作简便、周期短、存在假阳/阴 性
Pull-down应用示例 Smad3与TRB3相互作用 p62与TRB3相互作用 E GST-Pull Down GST pull-down GST pull-down Input GST GST-Smad3 GST p62-GST GST TRB3-GST a-HA TRB3-His P62-His 40 55 GST-Smad3 p62-GST 100 TRB3-GST 55 GST GST 25 GST- 25 Coomassie Blue GST fusion proteins GST fusion proteins Research Article 3235 ARTICLE TRB3 interacts with SMAD3 promoting tumor cell Recelved 16 May 2015 Accepted 29 n 2015 Published 3 Aug 201 DO 10.03/ncomm OPEN migration and invasion TRB3 links insulin/IGF to tumour promotion by nngn Yang.on Cen interacting with p62 and impeding autophagic/ proteasomal degradations Fang HuaKe ,Jiao-Jiao Yu,Xiao-Xi L Jun Yan,Xiao-Wei Zhang,Wei Sun'.Heng Lin,Shuang Shang Feng Wang'.Bing Cui.Rong Mu,Bo Huang Jian-Dong Jiang!2&Zhuo-Wei Hu!
Pull-down应用示例 Smad3与TRB3相互作用 p62与TRB3相互作用
CO-IP(免疫共沉淀) ▣原理：细胞在非变性条件下裂解，纟 细胞内 存在的蛋白-蛋白间相互作用被保留。用蛋 白A的抗体免疫沉淀A,可以同时沉淀与蛋 白A结合的蛋白B,可使用蛋白B的抗体进行 检测 ▣可以检测真实正理条件下的结合蛋白质 ▣难以检测低亲和力、瞬时结合的蛋白-蛋白 相互作用
CO-IP(免疫共沉淀) 原理：细胞在非变性条件下裂解，细胞内 存在的蛋白-蛋白间相互作用被保留。用蛋 白A的抗体免疫沉淀A，可以同时沉淀与蛋 白A结合的蛋白B，可使用蛋白B的抗体进行 检测 可以检测真实正理条件下的结合蛋白质 难以检测低亲和力、瞬时结合的蛋白-蛋白 相互作用
CO-IP-表达载体构建与细胞转染 Protein Protein A B His Flag Eukaryotic cells (293 Cellls)
CO-IP-表达载体构建与细胞转染 Flag Protein A Protein B His Eukaryotic cells (293 Cellls)