剪切型核酶 ●1、自身催化剪切型RNA 1、1剪切机制 1、2结构与功能的关系 锤头结构( Hammerhead 发夹结构( Hairpin) 斧头结构( Axehead 假结样结构( Pseudoknot-like) 1、3影响核酶活性的因素
三、剪切型核酶 ⚫ 1、自身催化剪切型RNA ⚫ 1、1 剪切机制 ⚫ 1、2 结构与功能的关系 ⚫ 锤头结构 (Hammerhead) ⚫ 发夹结构(Hairpin) ⚫ 斧头结构(Axehead) ⚫ 假结样结构(Pseudoknot-like) ⚫ 1、3 影响核酶活性的因素
●2、异体催化剪切型RNA ●核糖核酸酶P( RNasep)是内切核酸酶,是核 糖核蛋白体复合物,能剪切所有邙RNA前体的 5‘端,除去多余的序列,形成3’OH和5 磷酸未端 ● RNasep由M1RNA和蛋白质亚基组成。 ●体外: MIRNA具催化作用 蛋白质作为辅助因子 ●体内: MIRNA和蛋白质对酶活性都是必需的。 ●2、1剪切机制Mg2 2、2结构与功能的关系 MIRNA5‘端完 整结构对维持催化活性是必需的
⚫2、异体催化剪切型RNA ⚫ 核糖核酸酶P(RNaseP)是内切核酸酶，是核 糖核蛋白体复合物，能剪切所有tRNA前体的 5‘端，除去多余的序列，形成3’-OH 和 5’- 磷酸末端。 ⚫ RNaseP由M1RNA和蛋白质亚基组成。 ⚫体外： M1RNA具催化作用 ⚫ 蛋白质作为辅助因子 ⚫体内： M1RNA和蛋白质对酶活性都是必需的。 ⚫ 2、1剪切机制 Mg 2+ ⚫ 2、2结构与功能的关系 M1RNA 5‘端完 整结构对维持催化活性是必需的
og· COCVCVAAVO CACCC RNasep可剪切 GAALACACCCA IT G 前体5‘端41nt,5 C o 端成熟。不同 0· C ACOCAJAACCALL ACCCL C 9Ac 剪切位点→ tRNA的5端没 有顺序共同性,剪 切的准确性与剪切 e.0 66haocc c C 0 部位周围的核苷酸 A 36 2-1 顺序无关,表明在 GAUna 30 RNasep的组分内 :8 没有引导序列, RNasep所识别的 12G·c20 是底物的高级结构。 RNasep底物的二级结构
RNaseP可剪切 前体5‘端41nt, 5’ 端成熟。不同 tRNA的 5’ 端没 有顺序共同性，剪 切的准确性与剪切 部位周围的核苷酸 顺序无关，表明在 RNaseP的组分内 没有引导序列， RNaseP所识别的 是底物的高级结构。 RNaseP底物的二级结构 剪切位点
( G)(399nt) (nt)-+◎(环状395nt) (39Snt) G-IVS L-191VS RNA (414nt) 5 GA G3′ 9-消除催化剂 (394nt) GGAGGG GA + 22 27 (15nt)(环状399nt) 图12-2L-19IVS(395nt)和394 nt RNA的形成
19 IVS 1、转核苷酸作用 G.GGAG,GoH 2CpCpCpCpC- CpCpCpCpCpC +CpCpCpC 水解作用 s CCCCCo 3 GG.ccAnG,Ga 5 CpCpCpcpc- CpCpCpC+ pC 3、转磷酸作用 (x八C(5 pcpcpCpCpCp+ UpCpU CpCpCpcpcpc+ upCpur GC. 3 C. CC-R 4、去磷酸作用 cCi八.CC5 pCpCpCpCp-CpCpCpCpC +Pi 、限制性内切酶作用 CpUpCpUpn—+G— CpUpCpU C.c.,,,,, CPAr,Go 5 +GpN 图12-3-19IVS转核 苷酸作用机制
1、转核苷酸作用 2CpCpCpCpC CpCpCpCpCpC +CpCpCpC 2、水解作用 CpCpCpCpC CpCpCpC + pC 3、转磷酸作用 CpCpCpCpCpCp+UpCpU CpCpCpCpCpC + UpCpUp 4、去磷酸作用 CpCpCpCpCp CpCpCpCpC +Pi 5、限制性内切酶作用 CpUpCpUpN +G CpUpCpU +GpN