压力表温度、压力显示窗温度压力设置钮水位指示灯电源放汽阀培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间容器体积(mL)121℃灭菌所需最少时间(min)1520-502075-15025250-500100030过滤灭菌I：滤膜0.45um以下针筒滤膜支座针头O1).过滤器先灭菌，灭菌温度不超过121℃。2).溶液先进行初滤（滤膜0.65um）（四）作业（一）说明MS培养基的配制步骤，比较母液与工作液配制的难易程度；（二）简述培养基灭菌的主要环节及使用灭菌器的注意事项。6
6 培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间 容器体积(mL) 121℃灭菌所需最少时间(min) 20-50 15 75-150 20 250-500 25 1000 30 过滤灭菌Ⅰ: 滤膜 0.45um 以下 1).过滤器先灭菌，灭菌温度不超过 121℃。2).溶液先进行初滤(滤膜 0.65um) （四）作业 （一）说明 MS 培养基的配制步骤，比较母液与工作液配制的难易程度； （二）简述培养基灭菌的主要环节及使用灭菌器的注意事项
实验二无菌操作技术-花生无菌苗的培养一、目的要求通过在超净工作台上进行无菌操作验练，使学生初步掌握组织培养的无菌操作技术。二、原理灭菌是组织培养中重要的工作环节之一，是指采用理化手段杀死物体表面及其孔隙内的一切微生物，包括细菌的芽孢和真菌的孢子。组织培养中要求无菌室、超净工作台达到无菌状态，植物材料也要经过消毒灭菌后再接种，接种人员的双手同样如此。无菌室和超净工作台可采用甲醛、高锰酸钾混合薰蒸，结合紫外灯照射2030分钟：外植体可采用75%酒精和0.1%的升汞杀菌；双手可用70%-75%的酒精棉球擦拭；接种工具可采用75%酒精棉球擦拭，再经火焰灼烧灭菌。三、用品超净工作台、70%-75%的酒精、95%的酒精、盛有培养基的培养瓶、接种器械（主要指解部刀、剪刀、镊子等）、酒精灯、培养材料（根、茎、叶或种子等）、0.1%的升汞（或漂白粉）、无菌水等。四、方法步骤（一）在接种前4h用甲醛与高锰酸钾混合薰蒸接种室，并打开紫外灯照射30min（二）正式接种前半小时左右，打开超净工作台上的紫外灯和风机，20～30min后接种；（三）用肥皂水洗净双手，在缓冲间内穿好灭过菌的实验服、帽子与拖鞋，进入接种室：（四）用70%-75%的酒精擦拭工作台面和双手；（五）用蘸有70%-75%酒精的纱布擦拭装有培养基的培养器血，放进工作台：（六）把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上：（七）把植物材料放进70%-75%的酒精中浸泡约30s，再在0.1%的升汞中浸泡5～10min，或在10%的漂白粉上溶液中浸泡10～15min，浸泡时可进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触；然后用无菌水冲洗35次；（八）用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到，打开瓶盖；（九）取下接种器械，在火焰上灭菌：（十）把培养材料迅速放入培养瓶，扎上瓶口（每人接种5～10瓶）。操作期间应经常用75%酒精擦拭工作台和双手：接种器械应反复在95%的酒精中浸泡和在火焰上灭菌：（十一）接种结束后，清理和关闭超净工作台。注：材料的灭菌在接种前必须是材料完全无菌，应注意以下两个方面：1.选取植物组织内部无菌的材料消毒剂对材料消毒时，反表面消毒（1）从健壮的植株上取材，不要取有伤口和病虫的材料（2）晴天的中午或下午取材，不要在雨天、阴天或露水未干时取材。因为健壮的植株和晴天光合呼吸代谢旺盛的组织，自身有抵御病毒侵入的能力，这种组织一般是无菌的。2.完全杀死材料表面带有的各种微生物常用的消毒剂：漂白粉、次氯酸钠（钙）氯化汞H20270%-75%酒精等材料表面消毒的基本要求是既要杀死材料表面的微生物，又要不伤害材料，要求根据不同的材料，选择适当的消毒剂，合适的浓度和处理时间。（1）茎、叶的消毒植物的茎叶多暴露在空气中，有的表面着生茸生、蜡质等，消毒前应用自来水冲洗，并可用肥皂、洗衣粉或吐温等洗涤，再用70%的酒精泡儿秒钟，用无菌水洗2~3次，然后用其他表面消毒剂7
7 实验二 无菌操作技术-花生无菌苗的培养 一、目的要求 通过在超净工作台上进行无菌操作验练，使学生初步掌握组织培养的无菌操作技术。 二、原理 灭菌是组织培养中重要的工作环节之一，是指采用理化手段杀死物体表面及其孔隙 内的一切微生物，包括细菌的芽孢和真菌的孢子。组织培养中要求无菌室、超净工作台 达到无菌状态，植物材料也要经过消毒灭菌后再接种，接种人员的双手同样如此。 无菌室和超净工作台可采用甲醛、高锰酸钾混合薰蒸，结合紫外灯照射 20～30 分钟； 外植体可采用 75%酒精和 0.1%的升汞杀菌；双手可用 70%-75%的酒精棉球擦拭；接种工 具可采用 75%酒精棉球擦拭，再经火焰灼烧灭菌。 三、用品 超净工作台、70%-75%的酒精、95％的酒精、盛有培养基的培养瓶、接种器械（主 要指解剖刀、剪刀、镊子等）、酒精灯、培养材料（根、茎、叶或种子等）、0．1％的 升汞（或漂白粉）、无菌水等。 四、方法步骤 （一）在接种前 4h 用甲醛与高锰酸钾混合薰蒸接种室，并打开紫外灯照射 30min； （二）正式接种前半小时左右，打开超净工作台上的紫外灯和风机，20～30min 后接种； （三）用肥皂水洗净双手，在缓冲间内穿好灭过菌的实验服、帽子与拖鞋，进入接种室； （四）用 70%-75%的酒精擦拭工作台面和双手； （五）用蘸有 70%-75%酒精的纱布擦拭装有培养基的培养器皿，放进工作台； （六）把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在 95％酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上； （七）把植物材料放进 70%-75%的酒精中浸泡约 30s，再在 0．1％的升汞中浸泡 5～10min，或 在 10％的漂白粉上溶液中浸泡 10～15min，浸泡时可进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触； 然后用无菌水冲洗 3～5 次； （八）用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到，打开瓶盖； （九）取下接种器械，在火焰上灭菌； （十）把培养材料迅速放入培养瓶，扎上瓶口（每人接种 5～10 瓶）。操作期间应经常用 75％ 酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在 95％的酒精中浸泡和在火焰上灭菌； （十一）接种结束后，清理和关闭超净工作台。 注：材料的灭菌 在接种前必须是材料完全无菌，应注意以下两个方面： 1．选取植物组织内部无菌的材料 消毒剂对材料消毒时，反表面消毒 （1）从健壮的植株上取材，不要取有伤口和病虫的材料 （2）晴天的中午或下午取材，不要在雨天、阴天或露水未干时取材。 因为健壮的植株和晴天光合呼吸代谢旺盛的组织，自身有抵御病毒侵入的能力，这种组织一般 是无菌的。 2．完全杀死材料表面带有的各种微生物 常用的消毒剂：漂白粉、次氯酸钠（钙）氯化汞 H2O2 70%-75%酒精 等 材料表面消毒的基本要求是既要杀死材料表面的微生物，又要不伤害材料，要求根据不同的材 料，选择适当的消毒剂，合适的浓度和处理时间。 （1）茎、叶的消毒 植物的茎叶多暴露在空气中，有的表面着生茸生、蜡质等，消毒前应用自来水冲洗，并可用肥 皂、洗衣粉或吐温等洗涤，再用 70%的酒精泡几秒钟，用无菌水洗 2~3 次，然后用其他表面消毒剂