、基因工程的发展历史 (参见P255) 对基因工程的建立与发展具有重要意义 的几项关键技术 DNA的特异切剖 DNA的分子克隆(人工转化方法的建立) DNA的快速测序 DNA合成技术 聚合酶链式反应(PCR)(DNA的体外护增) 如DNA的定位诱叟技术
二、基因工程的发展历史 对基因工程的建立与发展具有重要意义 的几项关键技术: *DNA的特异切割 *DNA的分子克隆(人工转化方法的建立) *DNA的快速测序 *聚合酶链式反应(PCR) (DNA的体外扩增) *DNA合成技术 *DNA的定位诱变技术 （参见P255）
微生物学与基因工程的关糸(参见P256 们基因工程所用克隆载体主要是用质粒、病泰、嗌 菌体改造而成: 2)基因工程所用工具酶绝大多数是从傲生物中分离 纯化得到的; 微生物学不仅为基因工程提供了 理论基础, 同时也提供了操作技术 6)基因工程得以建立与发畏的理论基础主要来旬对 微生物的研究; 切)微生物的多样性,为基因工程提供了极其丰害而独 特的基因资源;
三、微生物学与基因工程的关系 1)基因工程所用克隆载体主要是用质粒、病毒、噬 菌体改造而成； 2)基因工程所用工具酶绝大多数是从微生物中分离 纯化得到的； 3)将外源DNA导入宿主细胞的人工转化方法,是在微 生物自然转化现象的基础上发展起来的； 4)微生物细胞是基因克隆的重要宿主， 5)微生物是基因产物的重要表达载体； 6)基因工程得以建立与发展的理论基础主要来自对 微生物的研究； 7)微生物的多样性,为基因工程提供了极其丰富而独 特的基因资源； 微生物学不仅为基因工程提供了 理论基础, 同时也提供了操作技术 （参见P256）
第三节微生物与基因工程工具酶(参见P264 基因工程所用到的绝大多数工具酶都是从不 同微生物中分离和纯化而级 限制性核酸内切酶(r 能识别双镂DNA分子的 点戴其附近切制DNA的一 性酶( restrition enzyme) 在细菌细胞内限制性酶 构成细菌的限制一—修饰糸 入细胞内的外娠DNA,同 本身DNA,以免被酶降
第二节 微生物与基因工程工具酶 基因工程所用到的绝大多数工具酶都是从不 同微生物中分离和纯化而获得的. 一、限制性核酸内切酶(restriction endonuclease) 能识别双链DNA分子的特定序列,并在识别位 点或其附近切割DNA的一类内切酶.简称为限制 性酶(restrition enzyme)。 在细菌细胞内限制性酶与DNA甲基化酶共同 构成细菌的限制–修饰系统,利用限制酶降解进 入细胞内的外源DNA,同时用甲基化酶修饰细菌 本身DNA，以避免被酶降解。 （参见P264）
1.命名与分类 取微生物属名的第一个字母和种名的头 两个字母组成三个斜体字母加以表示遇有 株名,再加在后面如果同一菌株先后发现几 个不同的酶,则用罗马数字加以表示 ECORI E:表示大肠杆菌属名第一个字毋 Co:表示种名头两个字母 R:表示株名 :表示该菌中第一个被分离出来的酶
1. 命名与分类 取微生物属名的第一个字母和种名的头 两个字母组成三个斜体字母加以表示,遇有 株名,再加在后面.如果同一菌株先后发现几 个不同的酶,则用罗马数字加以表示. EcoRI E: 表示大肠杆菌属名第一个字母 Co: 表示种名头两个字母 R：表示株名 I：表示该菌中第一个被分离出来的酶
根据限制酶识别和切剖DNA的特点可将限 制酶分为:、Ⅱ、Ⅲ三种类型 I型和Ⅲ型限制酶无切剖特异性或特异性不强 Ⅱ型限制酶切剖位点位于识别位点之内或在附 近,特异性最强 2.限制性核酸内切酶的基本特性 识别序列通常由4~8个碱基对组成,具有三重 旋转对称輻,序列呈回文结构 (palindromic structure 所有限制酶切剖DNA后,均产生合5磷酸基和 3'羟基的末端
根据限制酶识别和切割DNA的特点,可将限 制酶分为:I、II、III三种类型 I型和III型限制酶无切割特异性或特异性不强. II型限制酶切割位点位于识别位点之内或在附 近，特异性最强. 2. 限制性核酸内切酶的基本特性 识别序列通常由4～8个碱基对组成,具有二重 旋转对称轴,序列呈回文结构 (palindromic structure). 所有限制酶切割DNA后,均产生含5磷酸基和 3羟基的末端