酸层析斑点。用铅笔划下层析斑点，可进行定性、定量测定。五、结果与计算用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的R值。Rf（迁移率）=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。六、注意事项1.点样时要避免手指或睡液等污染滤纸有效面（即展层时样品可能达到的部分）。2.点样斑点不能太大（直径应小于0.3cm），防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。3.展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。七、思考题1.详述氨基酸纸层析的原理和用途6
6 酸层析斑点。用铅笔划下层析斑点，可进行定性、定量测定。 五、结果与计算 用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到 溶剂前沿的距离，计算各色斑的 Rf值。 Rf（迁移率）= 原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。 六、注意事项 1．点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面（即展层时样品可能达到的部分）。 2．点样斑点不能太大（直径应小于 0.3 cm），防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且吹风 温度不宜过高，否则斑点变黄。 3．展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。 七、思考题 1．详述氨基酸纸层析的原理和用途
实验三醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白一、实验目的1.掌握醋酸薄膜电泳技术分离蛋白质的基本原理2.学会电泳的一般操作注意：点样量对于电泳分辨率有影响；电泳过程稳压电源控制和恒定：透明前的处理。3.解释蛋白电泳的结果与分析二、实验原理采用醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素，是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120微米。醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术，它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。该技术已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结构球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。目前，醋酸纤维素薄膜电泳趋向于代替纸电泳。三、实验仪器与实验用品1.仪器及其它用品（1）醋酸纤维素薄膜—2cm×8cm（2）培养皿（直径910cm）（3）毛细管（4）直尺和铅笔（5）镊子（6）电泳仪和电泳槽（7）普通滤纸（8）染色缸2.实验材料：未溶血的人或动物血清3.试剂(1)新鲜血清——无溶血现象。(2)巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液（PH8.6，0.07mo1/L，离子强度0.06）：称取1.66g巴比妥（AR）和12.76g巴比妥钠（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约600mL，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定容至1000mL。置4℃保存，备用。(3)染色液：称取氨基黑10B0.5克，加入蒸馏水40毫升，甲醇50毫升和冰乙酸10毫升，混匀，在具塞试剂瓶中贮存。4）漂洗液：取95%乙醇45毫升，冰乙酸5毫升和蒸留水50毫升。混匀，在具塞试剂瓶内贮存。(5)透明液：甲液一一取冰乙酸15毫升和无水乙醇85毫升，混勾，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。乙液一一取冰乙酸25毫升和无水乙醇75毫升，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。四、实验步骤（一）仪器和薄膜的准备1.醋酸纤维素薄膜的润湿和选择：取2cm×8cm的薄膜，手无光泽面一端1.5cm处用铅笔轻轻地划一直线，然后将薄膜小心放入盛有缓冲溶液的培养皿内，使它漂浮在液面。若迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则表明薄膜质地均匀；若润湿时，薄膜上出现深浅不一致的条纹或斑点等，则为不均匀的薄膜。实验中应选用质地均匀的薄膜。因为纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。例如，膜厚薄不匀可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不清、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。将选用的薄膜用镊子轻压，使它全部浸入缓冲液内，待膜完全浸透（30分钟左右）后取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时分辨出光泽面和无光泽面。2.制作“滤纸桥”：剪裁尺寸合适的滤纸条。取双层附看在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲液内。然后，用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧7
7 实验三 醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白 一、实验目的 1.掌握醋酸薄膜电泳技术分离蛋白质的基本原理 2.学会电泳的一般操作 注意：点样量对于电泳分辨率有影响；电泳过程稳压电源控制和恒定；透明前的处理。 3.解释蛋白电泳的结果与分析 二、实验原理 采用醋酸纤维素薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素，是纤维素的 羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后， 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为 120 微米。 醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术，它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品 无拖尾和吸附现象等优点。该技术已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结构球蛋白、 同功酶的分离和测定等方面。目前，醋酸纤维素薄膜电泳趋向于代替纸电泳。 三、实验仪器与实验用品 1.仪器及其它用品 （1）醋酸纤维素薄膜——2cm×8cm （2）培养皿（直径 9—10cm） （3）毛细管 （4）直尺和铅笔 （5）镊子 （6）电泳仪和电泳槽 （7）普通滤纸 （8）染色缸 2.实验材料： 未溶血的人或动物血清 3.试剂 (1)新鲜血清——无溶血现象。 (2)巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液（PH8.6，0.07mol/L，离子强度 0.06）： 称取 1.66g 巴比妥（AR）和 12.76g 巴比妥钠（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约 600mL，稍 加热溶解，冷却后用蒸馏水定容至 1000mL。置 4℃保存，备用。 (3)染色液： 称取氨基黑 10B 0.5 克，加入蒸馏水 40 毫升，甲醇 50 毫升和冰乙酸 10 毫升，混匀，在具塞 试剂瓶中贮存。 (4)漂洗液：取 95%乙醇 45 毫升，冰乙酸 5 毫升和蒸馏水 50 毫升。混匀，在具塞试剂瓶内贮存。 (5)透明液： 甲液——取冰乙酸 15 毫升和无水乙醇 85 毫升，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。 乙液——取冰乙酸 25 毫升和无水乙醇 75 毫升，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。 四、实验步骤 （一）仪器和薄膜的准备 1. 醋酸纤维素薄膜的润湿和选择：取 2cm×8cm 的薄膜，于无光泽面一端 1.5cm 处用铅笔轻轻地 划一直线，然后将薄膜小心放入盛有缓冲溶液的培养皿内，使它漂浮在液面。若迅速润湿，整条薄膜 色泽深浅一致，则表明薄膜质地均匀；若润湿时，薄膜上出现深浅不一致的条纹或斑点等，则为不均 匀的薄膜。实验中应选用质地均匀的薄膜。因为纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。例如，膜 厚薄不匀可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不清、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。 将选用的薄膜用镊子轻压，使它全部浸入缓冲液内，待膜完全浸透（30 分钟左右）后取出，夹在 清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时分辨出光泽面和无光泽面。 2.制作“滤纸桥”：剪裁尺寸合适的滤纸条。取双层附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的 前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲液内。然后，用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧