3.应用极性增加溶于水不溶于水由于HPLC分离分析的高非极性离子灵敏度、定量的准确性、非离子极性适手非挥发性和热不稳定组分的分析，因此分配在工业、科学研究，尤102吸附反向其是在生物学和医学等正向离子分配方面应用极为广泛。如分配交换氨基酸、蛋白质、核酸、103烃、碳水化合物、药品、分子#多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属量10+有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的。尺寸排阻右图是各种HPLC方法105凝胶的应用范围及对象凝胶渗透过滤1062014/10/26HPLC分析实验
2014/10/26 HPLC分析实验 6 3. 应用 由于HPLC分离分析的高 灵敏度、定量的准确性、 适于非挥发性和热不稳 定组分的分析，因此， 在工业、科学研究，尤 其是在生物学和医学等 方面应用极为广泛。如 氨基酸、蛋白质、核酸、 烃、碳水化合物、药品、 多糖、高聚物、农药、 抗生素、胆固醇、金属 有机物等分析，大多是 通过HPLC来完成的。 右图是各种HPLC方法 的应用范围及对象 极性增加 不溶于水 溶于水 非极性 离子 非离子极性 吸附 反向 分配 分配 正向 分配 离子 交换 尺寸 排阻 凝胶 渗透 凝胶 过滤 分 子 量
三、HP-1100液相色谱仪配置：HIPLC仪器包括：高压输液装置（四元梯度高压泵）进样系统；分离系统；C.ODS色谱柱检测系统；（可变波长紫外检进样器测器）气高压泵A此外还配有梯度淋洗、自动分离柱进样和数据处理装置。色谱工作站贮液瓶信号检测器记录仪其工作过程如图所示。废液2014/10/26
2014/10/26 HPLC分析实验 7 HPLC仪器包括： 高压输液装置（四元梯度高 压泵） 进样系统; 分离系统; C8ODS色谱柱 检测系统;（可变波长紫外检 测器） 此外还配有梯度淋洗、自动 进样和数据处理装置。色谱 工作站 其工作过程如图所示。 三、HP-1100液相色谱仪 配置：
1.高压输液系统Q1）贮液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶剂过滤器(Ni合金)，其孔很约2 μum，可防止颗粒物进行泵内。○2）脱气：超声波脱气或真空加热脱气。溶剂通过脱气器中的脱气膜，相对分字量小的气体透过膜从溶剂中除去。O3）高压泵：对输液泵的要求：密封性好、输液流量稳定无脉动、可调范围宽、耐腐蚀。输液泵种类：恒压型和恒流型。恒压泵(类似于风箱)可迅速获得高压，适于柱的匀浆填充O但因泵腔体积大，在往复推动时，会引起脉动，且输出流量随色谱系统阻力（主要是柱填充物）变化而变化，现已较少使用。恒流型溶剂流量恒定，与柱填充情况无关，使用较多。有：机械注射式和机械往复式两种。应用最多的是机械往复式恒流泵(见下图。每分钟往复25~100次，因此脉动小。对流量变化敏感的检测器也会有噪声干扰，此时可连接一脉动尼)。2014/10/26HPLC分析实验8
2014/10/26 HPLC分析实验 8 1. 高压输液系统 1）贮液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶剂过滤器(Ni合金)， 其孔很约2 µm，可防止颗粒物进行泵内。 2）脱气：超声波脱气或真空加热脱气。溶剂通过脱气 器中的脱气膜，相对分子量小的气体透过膜 从溶剂中除去。 3）高压泵：对输液泵的要求：密封性好、输液流量稳 定无脉动、可调范围宽、耐腐蚀。 输液泵种类：恒压型和恒流型。 恒压泵(类似于风箱)可迅速获得高压，适于柱的匀浆填充。 但因泵腔体积大，在往复推动时，会引起脉动，且输出流 量随色谱系统阻力（主要是柱填充物）变化而变化，现已 较少使用。 恒流型溶剂流量恒定，与柱填充情况无关，使用较多。有 机械注射式和机械往复式两种。应用最多的是机械往复式 恒流泵(见下图。每分钟往复25~100次，因此脉动小。对流 量变化敏感的检测器也会有噪声干扰，此时可连接一脉动 阻尼器)
2.进样系统与GC相比，HPLC柱要短得多，因此由于柱本身所产生的峰形展宽相对要小些。即，HPLC的展宽多因一些柱外因素引起。这些因素包括：进样系统、连接管道及检测器的死体积。进样装置包括两种。○1）隔膜注射进样：使用微量注射器进样。装置简单、死体积小。但进样量小且重现性差。2）高压进样阀：目前最常用的为六通阀。由于进样量可由样品管控制，因此进样准确，重复性好，如图。进样装入样品采样环进色谱柱泵入溶剂出口2014/10/26HPLC分析实验9
2014/10/26 HPLC分析实验 9 2. 进样系统 与GC相比，HPLC柱要短得多，因此由于柱本身所产生 的峰形展宽相对要小些。即，HPLC的展宽多因一些柱外 因素引起。这些因素包括：进样系统、连接管道及检测 器的死体积。进样装置包括两种。 1）隔膜注射进样：使用微量注射器进样。装置简单、死体积小。 但进样量小且重现性差。 2）高压进样阀：目前最常用的为六通阀。由于进样量可由样品 管控制，因此进样准确，重复性好，如图。 装入样品 出口 进样 采样环 泵入溶剂 进色谱柱
液相色谱进样方式SyringeSyringeFixed-volumesampleloop?ToTowastewasteSamploopToTocolumncolumnSolventinSolventinLoadpositionInjectposition20(a)10(b)
2014/10/26 HPLC分析实验 10 液相色谱进样方式