限制性核酸内切酶能够识别 DNA上的特定碱基序列并从这个 位点切开DNA分子。 第一个核酸内切酶 ECORI是 Boyer实验室在1972年发现的, 它能特异性识别 GAATTC序列,将 双链DNA分子在这个位点切开并 立生具有粘性末端的小片段 nlpe& Pge
限制性核酸内切酶能够识别 DNA上的特定碱基序列并从这个 位点切开DNA分子。 第一个核酸内切酶EcoRI是 Boyer实验室在1972年发现的， 它能特异性识别GAATTC序列，将 双链DNA分子在这个位点切开并 产生具有粘性末端的小片段
(5)A TT(3) BamHI (5)GGATCC(3) TTCGAA CCTAGG Not (5,)GCGGCCGC(3) Clal (5'ATCGAT(3) CGCCGGGG TAGCTA (5) CTGCAG【3 EcORI (5] TC(3) GACGTC CTTAAG (5) CAGCTG旧3 ( 5GATATC(3, GTCGAC CTATAG t T111 5") GACNNNGTC【3 Haelll (5)GGCC(3) CTGNNNCAG C CGG 图5-1几种主要DNA内切酶所识别的序列及 其酶切末端。 nlpe& Pge
图5-1 几种主要DNA内切酶所识别的序列及 其酶切末端
PstI BamHI Smal AATTCCTGCAGAAGCTTCCGGATCCCCGGG 切割位点 只别序列 切割位点 G GAC CTTCGAAGGCCTAGGGGCCCTTAA 化学合成多克隆位点 EcoRI EcoRI DNA AATt CACTTAA CTGTAGC-- 连接酶 粘性末端: 质粒载体 alll Ba DNA连接酶 多克隆 经 EcoRI和Pvu 图5-2DNA连接酶能把不同的DNA片段连接成一个整体。a DNA的粘性末端;b.DNA的平末端;c.化学合成的具有 ECoRI粘 性末端的DNA片段。 nlpe& Pge
图5-2 DNA连接酶能把不同的DNA片段连接成一个整体。a. DNA的粘性末端; b. DNA的平末端; c. 化学合成的具有EcoRI 粘 性末端的DNA片段
仅仅能在体外利用限制性核酸内切酶 和DNA连接酶进行DNA的切割和重组,还 不能满足基因工程的要求,只有将它们 连接到具备自主复制能力的DNA分子上 才能在寄主细胞中进行繁殖。 具备自主复制能力的DNA分子就是分子 克隆的载体( vector)。病毒、噬菌体 和质粒等小分子量复制子都可以作为基 因导入的载体。 nlpe& Pge
仅仅能在体外利用限制性核酸内切酶 和DNA连接酶进行DNA的切割和重组，还 不能满足基因工程的要求，只有将它们 连接到具备自主复制能力的DNA分子上， 才能在寄主细胞中进行繁殖。 具备自主复制能力的DNA分子就是分子 克隆的载体（vector）。病毒、噬菌体 和质粒等小分子量复制子都可以作为基 因导入的载体
获得了用外源DNA片段和载体 分子重组而成的杂种DNA分子 后,还必须通过一个被称为细菌 转化的过程将其重新导入到寄主 细胞中,才能保证重组DNA分子 的增殖(图5-3)。 nlpe& Pge
获得了用外源DNA片段和载体 分子重组而成的杂种DNA分子 后，还必须通过一个被称为细菌 转化的过程将其重新导入到寄主 细胞中，才能保证重组DNA分子 的增殖（图5-3）