Foreign DNa gene for region of interest antibiotic Plasmid ECoRI resistance EcoRI EcoRI EcoRI ds Hybridization dNA ligas Recombinant DNA DNA insertion Bacteria Bactenal Bactera platted on medium omosome antibiotic Clo Only bactera containing recombinant dna got Clone DNA punnicaton Cloning into a plasmid
1973年 Stanley Cohen完成第一个基因重组实验 经体外重组获得杂合 pSC101Tc R6-31S DNA EcoR D EcoR[ N 杂合子转化入大肠杆菌 Tc )所需元件 连接酶 >工具酶(限制性内 Tc 切酶、连接酶等) 基因 Neo ↓转化大腼杆 >载体 cMk>受体细胞
1973年Stanley Cohen完成第一个基因重组实验 经体外重组获得杂合 DNA 杂合子转化入大肠杆菌 ➢所需元件： ➢工具酶（ 限制性内 切酶、连接酶等） ➢基因 ➢载体 ➢受体细胞
工具酶:基因工程中主要是指用于DNA和 RNA分子的切割、连接、聚合、修饰、反转 录等有关的各种酶系统。 限制性核酸内切酶 DNA聚合酶I 逆转录酶 T4DNA连接酶 ·碱性磷酸酯酶 未端转移酶 Taq DNA聚合酶
工具酶：基因工程中主要是指用于DNA和 RNA分子的切割、连接、聚合、修饰、反转 录等有关的各种酶系统。 • 限制性核酸内切酶 • DNA聚合酶I • 逆转录酶 • T4 DNA 连接酶 • 碱性磷酸酯酶 • 末端转移酶 • Taq DNA聚合酶
常用的工具酶 限制性核酸内切酶特异碱基序列切割DNA DNA连接酶 生成3′-5磷酸二酯键 DNA聚合酶I 探针标记、补平3未端 反转录酶 cDNA合成 多聚核苷酸激酶5磷酸化、探针标记 未端转移酶 3未端多聚尾 碱性磷酸酶 切除未端磷酸基
常用的工具酶 限制性核酸内切酶 特异碱基序列切割DNA DNA连接酶 生成3′- 5′磷酸二酯键 DNA聚合酶Ⅰ 探针标记、补平3′末端 反转录酶 cDNA合成 多聚核苷酸激酶 5′磷酸化、探针标记 末端转移酶 3′末端多聚尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基
限制性酸内切 (Restriction endonuclease, RE) 类由细菌产生的能专一识别双链 DNA中的特定碱基序列、并水解该位点磷 酸二酯键的核酸內切酶,简称限制酹或切 割酶。 根据限制酶的作用特性,一般分为三类 I、Ⅱ和Ⅲ型, 其中常用的是Ⅱ型限制酶
限制性核酸内切酶 (Restriction endonuclease, RE) 一类由细菌产生的能专一识别双链 DNA中的特定碱基序列、并水解该位点磷 酸二酯键的核酸内切酶，简称限制酶或切 割酶。 根据限制酶的作用特性，一般分为三类： —Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型， 其中常用的是Ⅱ型限制酶