工细胞培养 细胞计数和细胞活力测定 基于台盼蓝染色的自动细胞计数仪 ⊙Results Total concentration 9.09x10/ml LVE 99% R7程x67m Vi-cell 1% 1717m 法数者网口 Cell counter 将玻片插入仪器后，系统会对细胞进行自动对焦，能最大限度 减少与手动对焦相关的人为波动。适于计数大小介于~7u和60 um之间，悬液密度为1×104~1×107/mL的细胞
Ⅰ细胞培养 细胞计数和细胞活力测定 基于台盼蓝染色的自动细胞计数仪 将玻片插入仪器后，系统会对细胞进行自动对焦，能最大限度 减少与手动对焦相关的人为波动。适于计数大小介于~7 µm和60 µm之间，悬液密度为1×104 ~ 1×107 /mL的细胞。 Vi-cell Cell counter
I细胞培养 细胞生长增殖测定 定义： 检测细胞在培养基或组织中的生长速率 用途： 细胞生长和分化研究 评估药物的毒性 评估癌细胞生长的抑制情况 方法： 直接法(DNA合成检测；增殖标志物检测) 间接法（细胞ATP水平检测；代谢活性检测)
Ⅰ细胞培养 细胞生长增殖测定 用途： 细胞生长和分化研究 评估药物的毒性 评估癌细胞生长的抑制情况 定义： 检测细胞在培养基或组织中的生长速率 方法： 直接法（DNA合成检测；增殖标志物检测） 间接法（细胞ATP水平检测；代谢活性检测）
I细胞培养 细胞生长增殖测定 直接法一一DNA合成检测 原理：DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件，根据修饰 的寡核苷酸的掺入情况测定新DNA的合成速率。 用途：判断增殖（最准确可靠）；细胞活力；细胞凋亡。 1.BrdU法： Anti-BrdU antibody 视试剂盒不同，可显微镜下观察或酶标仪免疫荧光检测。 无放射性伤害。 without 不伤害细胞完整性，体内外均可标记。适于贴壁或悬浮细 胞，冰冻或福尔马林包埋组织切片；免疫组化、免疫细胞 化学、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。 新合成的胸腺啶 ● 需要一抗和二抗孵育，比较费时。 Incorparated Brdu 需要变性才能插入DNA
Ⅰ细胞培养 细胞生长增殖测定 直接法——DNA合成检测 原理：DNA的新组装合成是细胞生长的必要条件，根据修饰 的寡核苷酸的掺入情况测定新DNA的合成速率。 用途：判断增殖（最准确可靠）；细胞活力；细胞凋亡。 1. BrdU法： 视试剂盒不同，可显微镜下观察或酶标仪免疫荧光检测。 无放射性伤害。 不伤害细胞完整性，体内外均可标记。适于贴壁或悬浮细 胞，冰冻或福尔马林包埋组织切片；免疫组化、免疫细胞 化学、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。 需要一抗和二抗孵育，比较费时。 需要变性才能插入DNA。 新合成的胸腺嘧啶
I细胞培养 细胞生长增殖测定 直接法一一DNA合成检测 2.EdU法 ● 无需DNA变性；EdU能高效掺入新合成的DNA中，通过 温和的EdU-荧光染料Click.反应，能特异性检测DNA复制 活性。与BrdU法比，EdU法快速(30min)、灵敏、准确。 Andy Fluor'azide 无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更准确反映 DNA复制活性。 ●可镜下直接观察或酶标仪或流式细胞仪荧光检测，能实 现高通量分析。 Incorporated EdU ●适用于培养细胞或组织切片，也可通过注射小动物活体 0 成像分析(488、555、594、647四种荧光染料可选)。 H ●价格相对较贵
Ⅰ细胞培养 细胞生长增殖测定 直接法——DNA合成检测 2. EdU法： 无需DNA变性；EdU能高效掺入新合成的DNA中, 通过 温和的EdU-荧光染料Click反应，能特异性检测DNA复制 活性。与BrdU法比，EdU法快速（30min）、灵敏、准确。 无需抗原抗体反应，能在细胞和组织水平更准确反映 DNA复制活性。 可镜下直接观察或酶标仪或流式细胞仪荧光检测，能实 现高通量分析。 适用于培养细胞或组织切片，也可通过注射小动物活体 成像分析(488、555、594、647四种荧光染料可选）。 价格相对较贵
I细胞培养 细胞生长增殖测定 直接法一一增殖标志物检测 原理：有些抗原只存在于增殖细胞中，可通过特异性单抗对细胞增殖进行检测。 常用指标：Ki67,PCNA,DNA Topoisomerase IIB,Phosphorylated histone H3等。 ●能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。 适于贴壁或悬浮细胞，冰冻或福尔马林包 埋组织切片；免疫组化、免疫细胞化学。 ●需要一抗和二抗孵育，比较费时。 ●不适合高通量研究
Ⅰ细胞培养 细胞生长增殖测定 直接法——增殖标志物检测 原理：有些抗原只存在于增殖细胞中，可通过特异性单抗对细胞增殖进行检测。 常用指标：Ki67, PCNA, DNA Topoisomerase IIB, Phosphorylated histone H3 等。 能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。 适于贴壁或悬浮细胞，冰冻或福尔马林包 埋组织切片；免疫组化、免疫细胞化学。 需要一抗和二抗孵育，比较费时。 不适合高通量研究