工细胞培养 细胞培养的一般程序（贴壁细胞为例) 细胞复苏 1、水浴锅调至37°℃备用 2、超净台紫外灭菌30min 3、培养液预热至37°℃（注意无菌操作）；取3l培养液于离心管中备用 4、从液氮中取出细胞冻存管；放入水浴锅迅速融化 5、喷酒精灭菌，开盖，吸出细胞悬液至离心管中，1000转离心5min 6、培养瓶或10cm培养皿中加入9ml培养液；倒掉step5中离心管内培养液，取 1l培养液重悬细胞；并转移到培养瓶/皿中，轻轻摇匀，显微镜下观察 7、放入C02培养箱
Ⅰ细胞培养 细胞培养的一般程序（贴壁细胞为例） 细胞复苏 1、 水浴锅调至37°C备用 2、 超净台紫外灭菌30min 3、 培养液预热至37°C （注意无菌操作）；取3ml培养液于离心管中备用 4、 从液氮中取出细胞冻存管；放入水浴锅迅速融化 5、喷酒精灭菌，开盖，吸出细胞悬液至离心管中，1000转离心5min 6、培养瓶或10cm培养皿中加入9ml培养液；倒掉step5中离心管内培养液，取 1ml培养液重悬细胞；并转移到培养瓶/皿中，轻轻摇匀，显微镜下观察 7、 放入CO2培养箱
I细胞培养 细胞培养的一般程序 细胞传代 移除培养基 ↓ 预热PBS1-2ml洗2次 0.25%胰酶1~2ml消化（-/+EDTA;常温/37°C；1-10min) 约2天换液1次，细胞长 满及时传代；传代3次 后可用于后续实验。 镜下观察，大部分细胞变圆时加入培养液中和胰酶 (胰酶/培养液1：3) 轻柔吹打细胞，移入离心管，1000rpm,5min ↓ 移除上清，加入1ml培养基；细胞计数； 1:3或1：4传代
Ⅰ细胞培养 细胞培养的一般程序 细胞传代 约2天换液1次，细胞长 满及时传代；传代3次 后可用于后续实验。 移除培养基 预热PBS 1-2ml 洗2次 0.25% 胰酶1~2ml 消化（-/+EDTA；常温/37°C；1-10min） 镜下观察，大部分细胞变圆时加入培养液中和胰酶 （胰酶/培养液 1：3） 轻柔吹打细胞，移入离心管，1000rpm,5min 移除上清，加入1ml培养基；细胞计数； 1：3或1：4传代
I细胞培养 细胞培养的一般程序 DMSO能快速穿透细胞膜 进入细胞，降低冰点、延 细胞冻存 缓冻存过程，同时提高细 胞内离子浓度，减少细胞 配制细胞冻存液备用（含10%小牛血清/5~10%DMS0) 内冰晶形成，减少细胞损 伤。先配好含DMSO的冻 细胞生长至80%密度，移除培养基 存液，4度预冷。 具 预热PBS1-2ml洗2次 具 0.25%胰酶12ml消化 (-/+EDTA;常温/37C;1-10min) 镜下观察，大部分细胞变圆时加入培养液中和胰酶 (胰酶/培养液1：3) 细胞程序降温盒 具 (+异丙醇)置于-80°C 轻柔吹起细胞，移入离心管，1000rpm,5min 或：4c30min→-20°c2h→ ↓ -80°℃过夜→液氨 移除上清，加入1l细胞冻存液；细胞计数； 冻存管保种（1*10/ml);冻存
Ⅰ细胞培养 细胞培养的一般程序 细胞冻存 细胞生长至80%密度，移除培养基 预热PBS 1-2ml 洗2次 0.25% 胰酶1~2ml 消化（-/+EDTA；常温/37°C；1-10min） 镜下观察，大部分细胞变圆时加入培养液中和胰酶 （胰酶/培养液 1：3） 轻柔吹起细胞，移入离心管，1000rpm,5min 配制细胞冻存液备用（含10%小牛血清/5~10%DMSO） 移除上清，加入1ml细胞冻存液；细胞计数； 冻存管保种（1*106 /ml）；冻存 DMSO能快速穿透细胞膜 进入细胞，降低冰点、延 缓冻存过程，同时提高细 胞内离子浓度，减少细胞 内冰晶形成，减少细胞损 伤。先配好含DMSO的冻 存液，4度预冷。 细胞程序降温盒 （+异丙醇）置于-80°C 或：4°C 30min→ -20°C 2h→ -80°C过夜→液氮
工细胞培养 细胞计数和细胞活力测定 血球计数板计数法 制备细胞悬液：细胞密度>104/ml,细胞过多时需适当稀释，单个细胞率>95%。 加样：混悬细胞，取少许细胞悬液，从计数池一侧加入，不要溢出或出现气泡。 计数：10倍物镜下计数四角大方格内的细胞，压线者只计上边界和左边界。 计算：细胞数/ml=（四大格细胞总数/4)×104×稀释倍数。 XB-K-25 0.10mm SMIC 1 400 mm2 MADE IN CHINA 加样 点击查看源网页 01端 c计数室
Ⅰ细胞培养 细胞计数和细胞活力测定 血球计数板计数法 制备细胞悬液：细胞密度>104/ml，细胞过多时需适当稀释，单个细胞率>95%。 加样：混悬细胞，取少许细胞悬液，从计数池一侧加入，不要溢出或出现气泡。 计数：10倍物镜下计数四角大方格内的细胞，压线者只计上边界和左边界。 计算：细胞数/ml=（四大格细胞总数/4）×104×稀释倍数
I细胞培养 细胞计数和细胞活力测定 细胞活力测定一一台盼蓝染色法 制备单个细胞悬液：105~10/ml。 染色：0.04%台盼蓝染色1min,3min内计数。 计数：用血细胞计数板镜下分别计数活细胞和死细胞。 计算细胞活力：细胞活率(%)=「活细胞数/（活细胞数+死细胞数)1×100。 死细胞：染成蓝色 活细胞：拒染
Ⅰ细胞培养 细胞计数和细胞活力测定 细胞活力测定——台盼蓝染色法 制备单个细胞悬液：105~ 106/ml。 染色：0.04%台盼蓝染色1min，3min内计数。 计数：用血细胞计数板镜下分别计数活细胞和死细胞。 计算细胞活力： 细胞活率（%）=[活细胞数/（活细胞数+死细胞数）]×100。 死细胞：染成蓝色 活细胞：拒染