2-5酶解处理的条件 光:一般黑暗下静止进行; 温度:25℃,兼顾原生质体及酶活性; 时间:几小时到几十小时,太长不利于原 生质体的活性,一般<24小时。如烟草叶片 酶处理2小时后叶肉细胞解离完毕。 2-6其它 酶液中加入葡聚糖硫酸钾、CaC2等盐类 保护细胞膜、提高原生质体稳定性和活 力
2-6 其它 酶液中加入葡聚糖硫酸钾、CaCl2等盐类 保护细胞膜、提高原生质体稳定性和活 力 2-5 酶解处理的条件 光：一般黑暗下静止进行； 温度：25℃，兼顾原生质体及酶活性； 时间：几小时到几十小时，太长不利于原 生质体的活性，一般<24小时。如烟草叶片 酶处理2小时后叶肉细胞解离完毕
2-7原生质体分离过程:一步法 (以烟草叶片为例) 第一步:预处理即对烟草植株限制供水 第二步:取幼叶常规表面消毒后在无菌条件下 剥去外表皮切成4cm的小块 第三步:制作混合酶液(纤维素酶2%和果胶 酶0.5%)并加入的0.7mol甘露醇0.1mmol Cacl2 PH5.6 第四步:将小块烟叶放入混合酶液25℃处理 8~10小时 ·第五步:过滤、离心、洗涤(0.7mo甘露醇 液含01 m mol caci2)。如此2-3次、得原生 质体
2-7 原生质体分离过程：一步法 （以烟草叶片为例） • 第一步：预处理即对烟草植株限制供水 • 第二步：取幼叶常规表面消毒后在无菌条件下 剥去外表皮切成4cm的小块 • 第三步：制作混合酶液（纤维素酶2%和果胶 酶0.5 % ）并加入的0.7 mol甘露醇0.1 m mol CaCl2. PH5.6 • 第四步：将小块烟叶放入混合酶液25 ℃处理 8~10小时 • 第五步：过滤、离心、洗涤（ 0.7 mol甘露醇 液含0.1 m mol CaCl2 ）。如此2~3次、得原生 质体
图示原生质体分离过程(以叶片为例) 些 加果胶酶 和纤维素酶 过滤、离心g
图示原生质体分离过程（以叶片为例） 过滤、离心 加果胶酶 和纤维素酶
(二)原生质体纯化 酶解处理后得到混合液包括原生质体 细胞团和组织碎片等,必须将杂质和酶 液除去,才可以继续培养。 原生质体纯化方法有:离心沉淀法,漂 浮法,接口法三种
（二） 原生质体纯化 • 酶解处理后得到混合液包括原生质体、 细胞团和组织碎片等，必须将杂质和酶 液除去，才可以继续培养。 • 原生质体纯化方法有：离心沉淀法，漂 浮法，接口法三种