Expression of Exogenous Genes Promoter-to drive Transgene-expressing cDNA for gene of interest,with or without mutations,or cell-specific,tissue- containing sequences from other organisms etc... specific,or time-specific expression Pronuclear injection-linearized construct injected into male pronucleus of one cell 三 embryos,giving rise to offspring containing the transgene in all cell lineages.Several copies of transgene may be incorporated into the genome at ransom integration sites
Expression of Exogenous Genes
整合率的高低主要取决于受精卵和胚胎发育的时间。 基因的整合是随机的，多数插入单一染色体位点中。外 源基因的插入会引起宿主基因的DNA序列重排，缺失， 重复或易位， 外源基因也可不插入呈游离状态，以质粒形式存在表达 功能并传给子代。其详细机理现在也不是很清楚
整合率的高低主要取决于受精卵和胚胎发育的时间。 基因的整合是随机的，多数插入单一染色体位点中。外 源基因的插入会引起宿主基因的DNA序列重排，缺失， 重复或易位。 外源基因也可不插入呈游离状态，以质粒形式存在表达 功能并传给子代。其详细机理现在也不是很清楚
优点：外源DNA大小基本不受限制(1-50kb) 导入过程直观 整合率高 缺点：设备昂贵、环节较多 对操作人员有较高的技术要求 低效率（尤其是大家畜） 对卵子伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性 转基因沉默
优点：外源DNA大小基本不受限制(1-50kb) 导入过程直观 整合率高 缺点：设备昂贵、环节较多 对操作人员有较高的技术要求 低效率（尤其是大家畜） 对卵子伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性 转基因沉默
2、胚胎干细胞(ES细胞)法 将携带有外源基因的S细胞注入到动物的早期胚胎内： 可产生嵌合体及转基因动物 在S细胞上的基因操作：可以通过逆转录病毒感染、脂 质体介导、电穿孔、磷酸钙共沉淀等方法将外源基因 导入ES细胞 借用ES细胞系可将人们企望的某种不完整的、无功能基 因直接引入到ES细胞中，通过细胞增殖、筛选可得 到丧失了某种基因功能的动物后代
2、胚胎干细胞（ES细胞）法 将携带有外源基因的ES细胞注入到动物的早期胚胎内， 可产生嵌合体及转基因动物。 在ES细胞上的基因操作：可以通过逆转录病毒感染、脂 质体介导、电穿孔、磷酸钙共沉淀等方法将外源基因 导入ES细胞。 借用ES细胞系可将人们企望的某种不完整的、无功能基 因直接引入到ES 细胞中，通过细胞增殖、筛选可得 到丧失了某种基因功能的动物后代
Injection of ES cells into blastocysts
Injection of ES cells into blastocysts