Vm=kelo, k y LET lgklg m-lglEJo lg k=lg a ∴gVm-g[El=gA 2.303RT 2.303RT lg k +lgl elo +lg a 2.303RT 在不同温度下测(同一酶量的)Vm,以gVm对作图,得一直线,直线的斜率 2.303R a=-2303×8.314×斜率 若是复合的反应过程,直线可能会变折线,这说明限速步骤在转折点发生了改变,不同的线 段代表了不同的限速步骤,各自有不同的Ea。图C中左侧的正斜率线段是温度太高酶变性所致 Igm slope 2.303R transition Optimum B.求解离基团的标准焓(Van' t Hoff作图法) 根据Ⅷmor公式:qh,式中K为基团的解离常数 H° dhK=H°1 R dT,积分此式得∫dhK R T In K= hK=_MH°1 R T R T kK=H° 2.303R7+C △H°1 lg 2303R7-C, 2.303RT 测不同温度下某基团的解离常数K,按上式以pK对一作图,得一直线,直线的斜率为
11 0 V k[E] m = ， 0 [E] V k m = ， 0 lg k lgV lg [E] = m − ， ∵ RT Ea k A 2.303 lg = lg − ， ∴ lgVm − lg [E] 0 = RT Ea A 2.303 lg − ， lgVm = E A R T Ea lg[ ] lg 1 2.303 − + 0 + 在不同温度下测（同一酶量的）Vm，以 Vm lg 对 T 1 作图，得一直线，直线的斜率＝ R Ea 2.303 − ， Ea＝－2.303×8.314×斜率。 若是复合的反应过程，直线可能会变折线，这说明限速步骤在转折点发生了改变，不同的线 段代表了不同的限速步骤，各自有不同的 Ea。图 C 中左侧的正斜率线段是温度太高酶变性所致。 B．求解离基团的标准焓（Van’t Hoff 作图法） 根据 Van’t Hoff 公式： 2 ln RT H dT d K = ，式中 K 为基团的解离常数。 dT R T H d K = 2 1 ln ， 积分此式得 = dT R T H d K 2 1 ln = dT R T H K 2 1 ln ， C R T H K = − + 1 ln ， C R T H K = − + 1 2.303 lg C R T H − K = − 1 2.303 lg ， C R T H pK = − 1 2.303 。 测不同温度下某基团的解离常数 K，按上式以 pK 对 T 1 作图，得一直线，直线的斜率为
,△H°=2.303×8.314×斜率。 2.303R 63酶的抑制作用和抑制作用动力学 由于某种物质与酶相互作用使酶活性下降叫酶的抑制作用,这种物质就是抑制剂。而由其他 因素如加热造成的酶活性下降或丧失叫钝化作用。 631酶活性抑制的两大类型 A.可逆抑制作用( reversible inhibition) 抑制剂与酶以非共价键结合,用透析、超滤或凝胶过滤等方法可以除去抑制剂,恢复酶活性。 B.不可逆抑制作用( irreversible inhibition) 抑制剂与酶以共价键结合,用上述物理方法不能除去抑制剂和恢复酶活性。 不可逆抑制剂分为专一性和非专一性两类。专一性不可逆抑制剂仅和活性中心的基团反应 非专一性不可逆抑制剂可以和酶分子各部位的基团反应,甚至可以和几种不同的基团反应 632可逆和不可逆抑制作用的判断 除了用物理方法可除去抑制剂恢复酶活性的鉴别方法外,还可以用动力学方法鉴别 A.定量的抑制剂与一定量的酶溶液一起预保温,隔一段时间后,从中取出不同量的酶—一抑制 剂混合液,测其最大反应速度Vm,用Vmn对所取混合液量作图。图中曲线1为对照。曲线2为 不可逆抑制剂,因有一部分酶被抑制了,所以有活性的酶浓度下降,直线的斜率下降。曲线3 为可逆抑制剂,取少量混合液时,在反应体积一定的条件下,混合液的稀释程度较大,酶被抑制 的比例减少,相对活性较高:取较多混合液时,混合液的稀释程度较小,酶被抑制的比例较高, 相对活性较低 B.在反应系统中加入一定量的抑制剂,然后加不同的酶量测最大反应速度Vn。以Vm对酶量作 图。图中曲线1为对照。曲线2为不可逆抑制剂,当酶量超过不可逆抑制剂的当量时,才开始出 现酶活性,以后增加的 酶不受不可逆抑制剂的V 2不可逆抑制剂 一3可逆抑钠 影响,保持与对照相同 2不可逆抑制剂 3可逆抑需剂 的斜率。曲线3为可逆 一抑合液量 抑制剂
12 R H 2.303 ， = H 2.303×8.314×斜率。 6.3 酶的抑制作用和抑制作用动力学 由于某种物质与酶相互作用使酶活性下降叫酶的抑制作用，这种物质就是抑制剂。而由其他 因素如加热造成的酶活性下降或丧失叫钝化作用。 6.3.1 酶活性抑制的两大类型 A．可逆抑制作用（reversible inhibition） 抑制剂与酶以非共价键结合，用透析、超滤或凝胶过滤等方法可以除去抑制剂，恢复酶活性。 B．不可逆抑制作用（irreversible inhibition） 抑制剂与酶以共价键结合，用上述物理方法不能除去抑制剂和恢复酶活性。 不可逆抑制剂分为专一性和非专一性两类。专一性不可逆抑制剂仅和活性中心的基团反应， 非专一性不可逆抑制剂可以和酶分子各部位的基团反应，甚至可以和几种不同的基团反应。 6.3.2 可逆和不可逆抑制作用的判断 除了用物理方法可除去抑制剂恢复酶活性的鉴别方法外，还可以用动力学方法鉴别。 A．定量的抑制剂与一定量的酶溶液一起预保温，隔一段时间后，从中取出不同量的酶——抑制 剂混合液，测其最大反应速度 Vm，用 Vm对所取混合液量作图。图中曲线 1 为对照。曲线 2 为 不可逆抑制剂，因有一部分酶被抑制了，所以有活性的酶浓度下降，直线的斜率下降。曲线 3 为可逆抑制剂，取少量混合液时，在反应体积一定的条件下，混合液的稀释程度较大，酶被抑制 的比例减少，相对活性较高；取较多混合液时，混合液的稀释程度较小，酶被抑制的比例较高， 相对活性较低。 B．在反应系统中加入一定量的抑制剂，然后加不同的酶量测最大反应速度 Vm。以 Vm对酶量作 图。图中曲线 1 为对照。曲线 2 为不可逆抑制剂，当酶量超过不可逆抑制剂的当量时，才开始出 现酶活性，以后增加的 酶不受不可逆抑制剂的 影响，保持与对照相同 的斜率。曲线 3 为可逆 抑制剂