发酵制药 生产菌种的建立 1、生产菌的自然分离(1) 来源：大陆土壤、海洋水体 ÷样品的采集：表层土壤(0一10cm),海洋 (0一100m) ÷预处理：根据分离目的和微生物的特性。 1 温度； 2SDS一酵母膏，CaCO3、NaOH处理， 减 少细菌，有利于放线菌分离；乙酸乙酯、 氯仿、苯处理，除去真菌。 3 离心、膜过滤
1、生产菌的自然分离(1) ❖ 来源：大陆土壤、海洋水体 ❖ 样品的采集：表层土壤（0－10cm），海洋 （0－100m） ❖ 预处理：根据分离目的和微生物的特性。 1 温度； 2SDS－酵母膏，CaCO3、NaOH处理， 减 少细菌，有利于放线菌分离；乙酸乙酯、 氯仿、苯处理，除去真菌。 3 离心、膜过滤 发酵制药 生产菌种的建立
发酵制药 生产菌种的建立 1、生产菌的自然分离(2) 培养基： 选择适宜的培养基，营养和pH;添加抑制 剂。 。分离方法： (1)； 稀释法：无菌水，生理盐水，缓冲液 (2)滤膜法：0.22-0.45um。 细菌在膜上， 放线菌菌丝可穿透，进入培养基。 培养条件：温度。放线菌：25一30℃，32一 37℃，45一50C;7-14天至1月
1、生产菌的自然分离(2) ❖ 培养基： 选择适宜的培养基，营养和pH；添加抑制 剂。 ❖ 分离方法： （1）稀释法：无菌水，生理盐水，缓冲液 （2）滤膜法：0.22 － 0.45 µm。细菌在膜上， 放线菌菌丝可穿透，进入培养基。 ❖ 培养条件：温度。放线菌：25－30℃，32－ 37℃，45－50℃；7－14天至1月。 发酵制药 生产菌种的建立
发酵制药 生产菌种的建立 药物的筛选 琼脂扩散法— 活性测定： 非致病菌为对象，筛选生物活性物质。 耐药和超敏菌种。HPLC、LC一MS等， 分析鉴定活性物质。 靶向筛选 必高通量筛选 ·高内涵筛选
药物的筛选 ❖ 琼脂扩散法——活性测定： 非致病菌为对象，筛选生物活性物质。 耐药和超敏菌种。 HPLC、LC－MS等， 分析鉴定活性物质。 ❖ 靶向筛选 ❖ 高通量筛选 ❖ 高内涵筛选 发酵制药 生产菌种的建立
发酵制药 生产菌种的建立 2、菌种选育一 自然选育(1) 定义：不经过人工诱变处理，根据菌种的自 然突变而进行的菌种筛选过程。 应用：（1)菌种的提纯复壮。（2)防止退 化，稳定生产水平。1年1次。 过程 单孢 平板 单菌落 优良 种 分离 测活 菌株 效率低，增产幅度小
2、菌种选育——自然选育（1） ❖ 定义：不经过人工诱变处理，根据菌种的自 然突变而进行的菌种筛选过程。 ❖ 应用： （1）菌种的提纯复壮。（2）防止退 化，稳定生产水平。1年1次。 ❖ 过程 菌 种 单孢 子 单菌落 测活 平板 分离 优良 菌株 效率低,增产幅度小 发酵制药 生产菌种的建立
发酵制药 生产菌种的建立 2、菌种选育 诱变育种(2) 定义：人为创造条件（诱变剂处理），使菌 种发生变异，筛选优良个体，淘汰劣质个 理类：紫外线，快中子，激光，太空射 线。 ÷化学类：碱基类似物，嵌合剂，亚硝酸。 生物类：噬菌体，转座子。 特点：快速，简单，效益大。 缺点：无定向性
2、菌种选育——诱变育种（2） ❖ 定义：人为创造条件（诱变剂处理），使菌 种发生变异，筛选优良个体，淘汰劣质个 ❖ 物体理。类：紫外线，快中子，激光，太空射 线。 ❖ 化学类：碱基类似物，嵌合剂，亚硝酸。 ❖ 生物类：噬菌体，转座子。 特点：快速，简单，效益大。 缺点：无定向性。 发酵制药 生产菌种的建立