偶联反应测定法 使DNA模板在细菌无细胞体系中， 进行转录－转译偶联反应。经过改 良的这种体系中，可以使克隆在细 菌质粒或噬菌体基因组上的外源片 断进行体外表达，就可以比较容易 的确定多肽片断是由编码模板上的 哪个小片段指导合成的
偶联反应测定法 使DNA模板在细菌无细胞体系中， 进行转录－转译偶联反应。经过改 良的这种体系中，可以使克隆在细 菌质粒或噬菌体基因组上的外源片 断进行体外表达，就可以比较容易 的确定多肽片断是由编码模板上的 哪个小片段指导合成的
优点： 1. 放射性标记参入到蛋白质的效率， 比体内标记法高的多，而且这个系 统十分敏感。经35S标记的多肽分子， 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自 显影若干小时后可被迅速检出； 2. 应用这个体系，其它原核生物的基 因也能够得到有效的表达
优点： 1. 放射性标记参入到蛋白质的效率， 比体内标记法高的多，而且这个系 统十分敏感。经35S标记的多肽分子， 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自 显影若干小时后可被迅速检出； 2. 应用这个体系，其它原核生物的基 因也能够得到有效的表达
大肠杆菌表达载体
大肠杆菌表达载体
核糖体结合位点 启动子 转录终止子 复制 起点
核糖体结合位点 启动子 转录终止子 复制 起点
组 成 部 分 1.启动子： 最佳启动子具备的条件 第一 必须是将启动子，能够克隆基因的 蛋白质产物的表达量占细胞总蛋白的10%- 30%以上 第二 这个启动子应能呈现出一种低限的 基础转录水平，因为在表达毒性蛋白质或 是有损于寄主细胞生长的蛋白质的情况下， 使用高度抑制型的启动子是一种极为重要 的条件
组 成 部 分 1.启动子： 最佳启动子具备的条件 第一 必须是将启动子，能够克隆基因的 蛋白质产物的表达量占细胞总蛋白的10%- 30%以上 第二 这个启动子应能呈现出一种低限的 基础转录水平，因为在表达毒性蛋白质或 是有损于寄主细胞生长的蛋白质的情况下， 使用高度抑制型的启动子是一种极为重要 的条件