机械法: 1)研磨:将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中, 加入少量石英砂研磨或匀浆 2)组织捣碎器:这是一种较剧烈的破碎细胞的方法 通常可先用家用食品加工机将组织打碎,然后再 用10000r/min~20000r/min的内刀式组织捣 碎机(即高速分散器)将组织的细胞打碎
物理法: 1)反复冻融法:将待破碎的细胞冷至一15℃到一20°,然 后放于室温(或40°c)迅速融化,如此反复冻融多次,由 于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶 胀破碎。 2)溶胀法:细胞膜为天然的半透膜,在低渗溶液和低浓度的 稀盐溶液中,由于存在渗透压差,溶剂分子大量进入细胞 将细胞膜胀破释放出细胞内含物。如血红细胞置清水中易 破裂放出血红素。 3)超声波处理法:此法是借助超声波的振动力破碎细胞壁和 细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时,时间要长
4)压榨法:这是一种温和的、彻底破碎细胞的方 法。在1000×105P~2000×105P的高压下 使细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压,细胞 将彻底破碎。 5)冷热交替法:从细菌或病毒中提取蛋白质和核酸 时可用此法。在90C左右维持数分钟,立即放 入冰浴中使之冷却,如此反复多次,绝大部分细 胞可以被破碎
化学处理方法 用脂溶性的溶剂(如丙酮、氯仿、甲苯)或表面活性剂(如十 二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠)处理细胞时,可将细胞壁、 细胞膜的结构部分溶解,进而使细胞释放出各种酶类或DNA 等物质,并导致整个细胞破碎
用脂溶性的溶剂(如丙酮、氯仿、甲苯)或表面活性剂(如十 二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠) 处理细胞时，可将细胞壁、 细胞膜的结构部分溶解，进而使细胞释放出各种酶类或DNA 等物质，并导致整个细胞破碎
四、生物酶降解 生物酶(如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶)有降解细菌细胞壁 的功能。在用此法处理细菌细胞时,先是细胞壁消解,随之而 來的是因渗透压差引起的细胞膜破裂,最后导致细胞完全破碎 例如从某些细菌细胞提取质粒DNA时,不少方法都采用了 加溶菌酶(来白蛋淸)破坏细胞壁的步骤。当有些细菌对溶菌酶 不敏感时,可加巯基乙醇(ME)或者8mo1/L的尿素,以促进细 胞壁的消化。另外,也可加入蛋白酶K來提高破壁效果。 而在破坏酵母菌的细胞时,可采用蜗牛酶进行。一般对数 期的酵母细胞对该酶较敏感。将酵母细胞悬于0.1mo1/L柠檬酸 /磷酸氢二钠缓冲液(pH5.4)中,加入1%蜗牛酶,在30℃处理 30分钟,即可使大部分细胞壁破裂,如同时加入0.2%巯基乙醇 效果更好
生物酶(如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶)有降解细菌细胞壁 的功能。在用此法处理细菌细胞时，先是细胞壁消解，随之而 来的是因渗透压差引起的细胞膜破裂，最后导致细胞完全破碎。 例如从某些细菌细胞提取质粒DNA时，不少方法都采用了 加溶菌酶(来自蛋清)破坏细胞壁的步骤。当有些细菌对溶菌酶 不敏感时，可加巯基乙醇（ME）或者8mol/L的尿素，以促进细 胞壁的消化。另外，也可加入蛋白酶K来提高破壁效果。 而在破坏酵母菌的细胞时，可采用蜗牛酶进行。一般对数 期的酵母细胞对该酶较敏感。将酵母细胞悬于0.1mol/L柠檬酸 /磷酸氢二钠缓冲液(pH5.4)中，加入1%蜗牛酶， 在30℃处理 30分钟，即可使大部分细胞壁破裂，如同时加入0.2%巯基乙醇 效果更好。 四、 生物酶降解