一、酶免疫技术基本原理利用酶催化底物反应的生物放大作用,提高特异性抗原一抗体免疫学反应的检测敏感性的一种标记免疫技术。AgAbEAg + AbE+底物呈色反应
基本原理 利用酶催化底物反应的生物放大作用,提高特 异性抗原-抗体免疫学反应的检测敏感性的一 种标记免疫技术。 Ag + AbE AgAbE + 底物 呈色反应 一、酶免疫技术
AntigenAAntigenBEIA(酶免疫测定法)Addanti-Aantibodycovalentlylinkedtoenzyme固相Washawayunboundantibody聚苯乙烯AddenzymethatAg或Ab吸附到固相makescolouredproductfromadded colourlesssubstrate上的过程,称为包被Measureabsorbanceof lightbycolouredproduct
EIA 固相 聚苯乙烯 Ag或Ab吸附到固相 上的过程,称为包被 (酶免疫测定法)
基本特点:①包被或标记后保留酶和抗原(抗体)的活性:②酶促反应专一性,保证特异性:1③底物反应放大作用,提高敏感性:④酶标试剂保存稳定;5操作简便,安全易行
基本特点: ①包被或标记后保留酶和抗原(抗体)的活性; ②酶促反应专一性,保证特异性; ③底物反应放大作用,提高敏感性; ④酶标试剂保存稳定; ⑤操作简便,安全易行
常用酶及其底物1.辣根过氧化物酶(HRP)常用底物:邻苯二胺(OPD):反应显橙黄色,应避光,致癌性。四甲基联苯胺(TMB):反应后呈蓝色,无需避光,无致癌性但水溶性差。2.碱性磷酸酶(AP)常用底物:对硝基苯磷酸酯(p-NPP):产物为黄色。AP灵敏性高于HRP,但不易获得纯品,且稳定性低于HRP、价高,故应用不如HRP普及
常用酶及其底物 常用底物: 邻苯二胺(OPD):反应显橙黄色,应避光,致癌性。 四甲基联苯胺(TMB):反应后呈蓝色,无需避光,无致癌性, 但水溶性差。 常用底物: 对硝基苯磷酸酯(p-NPP):产物为黄色。 AP灵敏性高于HRP,但不易获得纯品,且稳定性低于HRP、 价高,故应用不如HRP普及。 1.辣根过氧化物酶(HRP) 2.碱性磷酸酶(AP)