一、化学裂解法(Maxam-Gilberti法) 基于某些化学试剂可以使DNA链在1个或2个碱 基处发生专一性断裂的特性，精确地控制反应强度， 使一个断裂点仅存在于少数分子中，不同分子在不 同位，点断裂，从而获得一系列大小不同的DNA片段， 将这些片段经电泳分离。 分析前，用同位素标记DNA的5'末端，经放射 自显影即可在X胶片上读出DNA链的序列。 21
21 一、化学裂解法(Maxam-Gilbert法) 基于某些化学试剂可以使DNA链在1个或2个碱 基处发生专一性断裂的特性，精确地控制反应强度， 使一个断裂点仅存在于少数分子中，不同分子在不 同位点断裂，从而获得一系列大小不同的DNA片段， 将这些片段经电泳分离。 分析前，用同位素标记DNA的5´末端，经放射 自显影即可在X胶片上读出DNA链的序列。 生物化学与分子生物学教研室
5P-GATCGGACCT 3 G反应 A+G反应 C+T反应 C反应 G A+G C+T GATCGGACCT #GATCGGACC #GATCGGAC GATCGGA 二 二 #GATCGG #GATCG #GATC #GAT 二 #GA #G Maxam-Gilbert化学降解测序法 22
22 Maxam-Gilbert 生物化学与分子生物学教研室 化学降解测序法
二、DNA链末端合成终止法 (Sanger双脱氧链终止法) 0 HO-P-O-P-O-P-O-CH, A,C,G or T OH OH OH Y 3 OH 脱去 双脱氧核苷三磷酸 23
23 (Sanger双脱氧链终止法) HO P O P O P O CH2 O O O OH OH OH O A, C, G or T 1′ 3 ′ OH γ β α 5 ′ 双脱氧核苷三磷酸 脱去 二、DNA链末端合成终止法 生物化学与分子生物学教研室
教研 引物 DNA单链模板 延伸的新合成链 ⊙⊙ 3 掺入的双脱氧核苷酸 末端终止
24 24 DNA单链模板 生物化学与分子生物学教研室 末端终止
AACGGTACACG- 5 含待测DNA的M13模板 53AACGGTACACG 模板-引物杂交 polI 产物：分在四管内 dNTP(C,G,T,A) 引物延长与 35S-a-dATP 合成阻断 C(ddCTP) G(ddGTP) (ddTTP) (ddATP) -TTGCCATGTGddc TTGCCATGTddG TTGCCATGddT TGccd ■-TTGCddc ■-TTGCCATddG TTGCCAddT TTGddc TTddG TddT ddT 25
25 生物化学与分子生物学教研室