实验五根系活力的测定 、意义 根系具有吸收养分、水分、支持植株和合成有机物的能力。它是作物赖以生存的基础。 根系的生长和地上部的生长是密切相关的和互为依存的,根系生长好才能保证地上部各器官 也相应地繁茂茁壮。因此,硏究根系的活力对于搞清作物的根部营养,提高作物根系吸收养 分、水分能力等具有重要的实际意义 在科学研究中常把根系的呼吸强度、阳离子代换量(CEC)、对有色物质的吸附量和ATP 酶的活性等作为作物根系活力的指标 二、测定原理及方法 (一)根系表面积的测定 1.甲烯兰吸附法 (1)原理:根据植物根系吸收矿质养分的理论,根系对溶质的最初吸收具有吸附的特性。 假定吸收时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层,因此能根据根系对某物质 的吸附量来测定根的吸收面积。常用甲烯兰( ClshishssC1)作为被吸附物质,已知1nmg甲烯 兰胶单分子层时占用1.1平方米的面积。故可由它被吸附前后溶液的浓度变化用比色法准确 地测定根系总吸收面积 当根系在甲烯兰溶液中已达饱和并仍留在溶液中时,根系的活跃部分能把已吸附在根表 的甲烯兰吸收到细胞中去,并继续吸附甲烯兰。因此,又可以从后一吸附量中求出根系的活 跃吸收面积。 (2)方法 ①取出完整根系(注意保留根尖和细根),小心地清洗掉根表吸持的砂粒和土粒,洗诤 后用吸水纸除去根表水分 ②将根放入有刻度的容器中〈试管或置筒),缓缓加水至某一刻度,取出根系待水从根 上流入容器中,准确用滴定管加水至刻度处,加入水量即为根系的总体积,并记载 ③根据根系的总体积,吸取0.0002N的甲烯兰溶液(每升溶液中含甲烯兰64mg), 吸取量约为根系总体积的十倍,分别放入三个有1、2、3编号的小烧杯中,准确记下每杯所 取溶液的毫升数。 ④取量好体积的根系,用吸水纸小心吸去根表水分,切忌损伤根系,依次浸入盛有甲烯 兰溶液的小烧杯中,在每杯中浸泡的时间为1.5分钟。注意每次取出时都要使甲烯兰溶液从 根表流回到原烧杯中。 ⑤从三个烧杯中各取1m1溶液放入刻度试管中,再稀释至10倍,用光电比色计在660nm 波长处测定其光密度,并根据标准曲线,求出每杯浸过根系后溶液中剩下的甲烯兰毫克数。 (3)结果计算 ①总吸收面积(m2)=[(C1-C1)×V1+(C2-C2)×V2]×1.1 ②活跃吸收面积(m2)=[(C3-C3)×V3×1.1 ③活跃吸收面积(%)=活跃吸收面积(cm)/根的体积{cm} (注):C1、C2、C3——1、2、3号烧杯中加入甲烯兰溶液的浓度(ng/ml)
实验五 根系活力的测定 一、意义 根系具有吸收养分、水分、支持植株和合成有机物的能力。它是作物赖以生存的基础。 根系的生长和地上部的生长是密切相关的和互为依存的，根系生长好才能保证地上部各器官 也相应地繁茂茁壮。因此，研究根系的活力对于搞清作物的根部营养，提高作物根系吸收养 分、水分能力等具有重要的实际意义。 在科学研究中常把根系的呼吸强度、阳离子代换量（CEC）、对有色物质的吸附量和 ATP 酶的活性等作为作物根系活力的指标。 二、测定原理及方法 （一）根系表面积的测定 1．甲烯兰吸附法 （1）原理：根据植物根系吸收矿质养分的理论，根系对溶质的最初吸收具有吸附的特性。 假定吸收时在根系表面均匀地覆盖了一层被吸附物质的单分子层，因此能根据根系对某物质 的吸附量来测定根的吸收面积。常用甲烯兰（C16H18H3SCl）作为被吸附物质，已知 1mg 甲烯 兰胶单分子层时占用 l.1 平方米的面积。故可由它被吸附前后溶液的浓度变化用比色法准确 地测定根系总吸收面积。 当根系在甲烯兰溶液中已达饱和并仍留在溶液中时，根系的活跃部分能把已吸附在根表 的甲烯兰吸收到细胞中去，并继续吸附甲烯兰。因此,又可以从后一吸附量中求出根系的活 跃吸收面积。 （2）方法： ①取出完整根系（注意保留根尖和细根），小心地清洗掉根表吸持的砂粒和土粒，洗诤 后用吸水纸除去根表水分。 ②将根放入有刻度的容器中〈试管或置筒〉，缓缓加水至某一刻度，取出根系待水从根 上流入容器中，准确用滴定管加水至刻度处，加入水量即为根系的总体积，并记载。 ③根据根系的总体积，吸取 0.0002 N 的甲烯兰溶液（每升溶液中含甲烯兰 64 mg）， 吸取量约为根系总体积的十倍，分别放入三个有 1、2、3 编号的小烧杯中，准确记下每杯所 取溶液的毫升数。 ④取量好体积的根系，用吸水纸小心吸去根表水分，切忌损伤根系，依次浸入盛有甲烯 兰溶液的小烧杯中，在每杯中浸泡的时间为 l.5 分钟。注意每次取出时都要使甲烯兰溶液从 根表流回到原烧杯中。 ⑤从三个烧杯中各取 1ml 溶液放入刻度试管中，再稀释至 l0 倍，用光电比色计在 660nm 波长处测定其光密度，并根据标准曲线，求出每杯浸过根系后溶液中剩下的甲烯兰毫克数。 （3）结果计算： ①总吸收面积（m 2）= [(Cl－C11 )×V1＋（C2－C2l）×Ⅴ2] ×1.1 ②活跃吸收面积（m 2）=[（C3- C31）× V3 ×1.1 ③活跃吸收面积 (％)＝活跃吸收面积（cm3）／根的体积｛cm3｝ （注）： Cl、C2、C3——1、2、3 号烧杯中加入甲烯兰溶液的浓度〈mg／ml〉
C、C2、C3——1、2、3号烧杯中浸根后甲烯兰溶液的浓度〈mg/m〉 Ⅵ1、V2、V3—-1、2、3号烧杯中加入甲烯兰溶液的量{皿)。 (4)仪器试剂及标准溶液的配制: ①刻度试管或量筒。 ②50m1小烧杯:3个 ③光电比色计:一台 ④0.000N甲烯兰溶液:精确称取0.0640g甲烯兰,放入烧杯中加水溶解,并转入100mnl 容量瓶中,加水定容 ⑤甲烯兰标准溶液:吸取0.0002N的甲烯兰溶液15.6ml,放入100m容量瓶中,加水至 刻度摇匀。此液每毫升含甲烯兰0.010ng,取刻度试管η支,编号,依次吸取该溶液0,1,0, 2.0,4.0,6.0,8.0,10.0m1,分别加水至10m1,依次相当于每毫升含甲烯兰0,0.0001, 0.002,0.004,0.006,0.0008,0.010mg,依同法比色。 2.硝酸钙重量法: (1)原理:当干燥的植物根系浸入一种溶液中,然后捞出淋干表面的溶液,那么就会有 部分溶液被吸附在根系表面,溶液的重量就会减少。硝酸钙是经过硏究后筛选出的最为理想 的物质,因为它是中等分子〈分子量64.1)且极易溶解于水。当硝酸钙和水以6:1的比例 配制成溶液时,很易吸附在根系表面,这样可以通过重量差减法求出被根系吸附的量,以此 表示根系的表面积。 (2)方法步骤: ①将植物根系冲洗干净,然后风干备用 ②将6份的Ca(NO3)2加入1份R的水中,轻微的加热使其溶解,配制成Ca(NO3)2: H20为6:1的溶液备用。 ③根据根系的大小在烧杯中取一定量的上述溶液,要充分保证根系全部浸入,放在天平 或台秤上,记录其重量(G0)。 ④将风干的根系浸入溶液10秒钟,然后取出根系在烧杯上方停留30秒钟,使表面的多 余溶液淋进烧杯,记录其重量(G),两次重量差ΔG=C-G1就表示被根系吸附的量,即根 系表面积的大小 (3)仪器和试剂 ①天平或台秤:一架。 ②镊子:一把 (3)烧杯 ④玻棒 ⑤Ca(NO3)2溶液 〈二〉根系活力的测定 1.a-萘胺法 (1)原理:根对a-萘胺的氧化力与其呼吸强度有着密切关系,根据研究认为根表对
Cl1、C21、C31——1、2、3 号烧杯中浸根后甲烯兰溶液的浓度〈mg／ml〉 Vl、V2、V3——1、2、3 号烧杯中加入甲烯兰溶液的量｛mL）。 （4）仪器试剂及标准溶液的配制： ①刻度试管或量筒。 ② 50 ml 小烧杯：3 个 ③ 光电比色计：一台 ④ 0.0002N 甲烯兰溶液：精确称取 0.0640g 甲烯兰，放入烧杯中加水溶解，并转入 1000ml 容量瓶中，加水定容。 ⑤甲烯兰标准溶液：吸取 0.0002 N 的甲烯兰溶液 15.6ml，放入 100ml 容量瓶中，加水至 刻度摇匀。此液每毫升含甲烯兰 0.010mg，取刻度试管 7 支，编号，依次吸取该溶液 0,1.0， 2.0， 4.0，6.0，8.0，10.0ml，分别加水至 l0ml，依次相当于每毫升含甲烯兰 0，0.000l， 0.002，0.004，0.006, 0.0008，0.010 mg，依同法比色。 2.硝酸钙重量法： (1)原理：当干燥的植物根系浸入一种溶液中，然后捞出淋干表面的溶液，那么就会有一 部分溶液被吸附在根系表面，溶液的重量就会减少。硝酸钙是经过研究后筛选出的最为理想 的物质，因为它是中等分子〈分子量 64.1〉且极易溶解于水。当硝酸钙和水以 6:1 的比例 配制成溶液时，很易吸附在根系表面，这样可以通过重量差减法求出被根系吸附的量，以此 表示根系的表面积。 (2)方法步骤： ①将植物根系冲洗干净，然后风干备用。 ②将 6 份的 Ca(NO3)2 加入 1 份 R 的水中，轻微的加热使其溶解，配制成 Ca（NO3）2 ： H2O 为 6 ：1 的溶液备用。 ③根据根系的大小在烧杯中取一定量的上述溶液，要充分保证根系全部浸入，放在天平 或台秤上，记录其重量（G0）。 ④将风干的根系浸入溶液 l0 秒钟，然后取出根系在烧杯上方停留 30 秒钟，使表面的多 余溶液淋进烧杯，记录其重量（G1），两次重量差ΔG＝G0- Gl 就表示被根系吸附的量，即根 系表面积的大小。 （3）仪器和试剂 ①天平或台秤：一架。 ②镊子：一把 ⑶烧杯 ④玻棒 ⑤Ca(NO3)2 溶液 〈二〉根系活力的测定 l.α- 萘胺法 （1）原理：根对α- 萘胺的氧化力与其呼吸强度有着密切关系，根据研究认为根表对
a-萘胺的氧化作用是在过氧化物酶的催化下进行的,使部分根表染成红色,其反应如下: a一燕胺 〔2-羟基-1-萘胺) 故可根据α一萘胺溶液与根系接触一定时间后,测定溶液中未被氧化的α一萘胺含量,确定 根的活力 溶液中未被氧化的α一萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成了红色的 偶氮染料,可用比色法测定α-萘胺含量。反应如下: SO3H SO3H +2H++N02 十2HzO NH 2 H三N 对氨基苯磺酸 重氮化合物) NH2 SO3H NEN ca-萘胺 H三N 〔对一苯磺酸-偶氮一a-胺 〔重氮化合物 (2)方法 ①取出完整根系小心洗净,再用吸水纸吸干根上的水后,淮确称取鲜根1-2.0g,放入 l0om1三角瓶中,加入40pm的α一萘胺溶液和磷酸缓冲液的等量混合液50ml,轻轻摇动。 ②静置5-10分钟,根的迅速吸附业已完成,从瓶中取出2ml溶液,放入20ml刻度 试管中,以此刻作为零时,将其余的溶液塞好瓶塞,放在25℃的振荡机上,振荡3-6小时 ③振荡完毕后再从瓶中吸取2m1溶液放入另一个20m1刻度试管中 ④在讲行上述步骤时,因萘胺溶液会自动氧化,必须同时作无根的同样操作下的空白试 验 ⑤在上述二次所取及空白试验二次所取的2ml测定液中,各加蒸馏水I0ml,混匀后 再加人1%的对氨基苯磺酸lml和10pm的亚硝酸钠溶液1m,混匀,置室温(20~25℃下
α- 萘胺的氧化作用是在过氧化物酶的催化下进行的，使部分根表染成红色，其反应如下： 故可根据α一萘胺溶液与根系接触一定时间后，测定溶液中未被氧化的α- 萘胺含量，确定 根的活力。 溶液中未被氧化的α- 萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成了红色的 偶氮染料，可用比色法测定α- 萘胺含量。反应如下： （2）方法 ①取出完整根系小心洗净，再用吸水纸吸干根上的水后，淮确称取鲜根 l- 2.0g，放入 100ml 三角瓶中，加入 40ppm 的α一萘胺溶液和磷酸缓冲液的等量混合液 50ml，轻轻摇动。 ②静置 5－l0 分钟，根的迅速吸附业已完成，从瓶中取出 2 ml 溶液，放入 20 ml 刻度 试管中，以此刻作为零时，将其余的溶液塞好瓶塞，放在 25℃的振荡机上，振荡 3－6 小时。 ③振荡完毕后再从瓶中吸取 2 ml 溶液放入另－个 20ml 刻度试管中。 ④在讲行上述步骤时，因萘胺溶液会自动氧化，必须同时作无根的同样操作下的空白试 验。 ⑤在上述二次所取及空白试验二次所取的 2 ml 测定液中，各加蒸馏水 I0 ml，混匀后 再加人 1％的对氨基苯磺酸 1ml 和 10ppm 的亚硝酸钠溶液 1mL，混匀，置室温（20～25℃下
5分钟使之显色),然后加入蒸馏水,定容至20m1。在20-60分钟内在510mm波长比色, 记下光密度,由标准曲线查出a-萘胺含量。 (3)结果计算: α一萘胺氧化总量〈μg〉气[第一次吸取液测定值(μg/ml)-第二次吸取液洇定值〈g /m1〉]×24ml α一萘胺自发氧化量〈μg)≡(空白试验第一次吸取液测定值(g/m1)一空白试验第 二次吸取液溺定值(μg/m1)〉)×24ml 一萘胺生物氧化强度=一萘胺氧化总量(ug)-a·禁胺自发氧化量(ug) (根活力) 反应时间×根鲜重 (ug.h.g FW-) 〈4〉仪器试剂及α一萘胺标准溶液的配制 ①三角瓶:100m12个 ②刻度试管:20m12个 ③移液管:2m11支,10m11支,1m1l2支 ④振荡机 ⑤光电比色计:一台 ⑥4ppmα一萘胺溶液:精确称取0.I000g分析纯α一萘胺放入50m蒸馏水中溶解〈须 微微加热〉,冷却后定容至100ml即为1000PPm,保存于棕色瓶中,置低温黑暗处保存,用 前稀释25倍,即为40ppmn溶液 ⑦1%对氨基苯磺酸溶液:称取lg对氨基苯磺酸溶于100m30%的乙酸中。 ⑧l00pp亚硝酸钠溶液:称0.1g亚硝酸钠溶于1000ml蒸馏水中 ⑨磷酸缓冲液(pH=7),A液称取纯Na2HPO·2H2011.876g,溶于1000ml蒸馏水中;B 液称取纯H2PO49.078g溶于1000m1蒸馏水中,A、B两种溶液以6:4的比例混合。 ⑩α一萘胺标准溶液的配制 用40ppm的α一萘胺溶液,配制好40,30,20,15,5ppm的标淮溶液。另取20ml 刻度试管6支,编号,1-5管各加入不同浓度的α萘胺标准溶液Ⅰml,磷酸缓冲液1ml, 在第6支试管中,加蒸馏水Ⅰml,磷酸缓冲液lml,作为参比管。然后于每支试管中加入 10皿l蒸馏水,1%对氨基苯磺酸Iml和100ppm的亚硝酸钠溶液lm1,混匀。置室温下 分钟使之显色,然后加蒸馏水定容至20ml,摇匀,在20-60分钟内用510nm波长下比色, 以参比管光密度为零,读取各管的光密度,将结果绘制标准曲线。 2.氯化三苯基四氮唑(TTC)法 (1)原理:氯化萘基唑(TTC)是标准氧化还原电位为80毫伏的氧化还原物质,溶于水 中为无色溶液,但还原后生成不溶于水的三苯基甲。生成的甲呈稳定的红色,不会被空气 中的氧自动氧化。所以被广泛用作酶试验的受氢体。植物根引起的TTC还原,可因加入琥珀 酸、延胡索酸、苹果酸得到加强,而被丙二酸、碘乙酸所严重抑制,所以,它能够测定琥珀
5 分钟使之显色），然后加入蒸馏水，定容至 20 ml。在 20-60 分钟内在 510 nm 波长比色， 记下光密度，由标准曲线查出α- 萘胺含量。 (3)结果计算： α一萘胺氧化总量〈µg〉=[第一次吸取液测定值（µg／ml）- 第二次吸取液洇定值〈µg ／ml〉] ×24 ml α一萘胺自发氧化量〈µg〉＝（空白试验第一次吸取液测定值（µg／ml）一 空白试验第 二次吸取液溺定值〈µg／ml〉）×2 4 ml α一萘胺生物氧化强度= 〈4〉仪器试剂及α—萘胺标准溶液的配制 ①三角瓶：100ml 2 个 ②刻度试管： 20m l 2 个 ③移液管： 2 ml 1 支，10ml 1 支，1ml 2 支 ④振荡机 ⑤光电比色计：一台 ⑥40ppm α一萘胺溶液：精确称取 0.1000g 分析纯α—萘胺放入 50 ml 蒸馏水中溶解〈须 微微加热〉，冷却后定容至 100 ml 即为 l000PPm，保存于棕色瓶中，置低温黑暗处保存，用 前稀释 25 倍，即为 40 ppm 溶液。 ⑦ l％对氨基苯磺酸溶液：称取 lg 对氨基苯磺酸溶于 100ml 30％的乙酸中。 ⑧100 ppm 亚硝酸钠溶液：称 0.1g 亚硝酸钠溶于 l000ml 蒸馏水中。 ⑨磷酸缓冲液(pH＝7)，A 液称取纯 Na2 HPO4·2H2O 11.876g，溶于 l000ml 蒸馏水中;B 液称取纯 KH2PO4 9.078g 溶于 l000 ml 蒸馏水中，A、B 两种溶液以 6:4 的比例混合。 ⑩α一萘胺标准溶液的配制： 用 40ppm 的α一萘胺溶液，配制好 40，30，20，15，5 ppm 的标淮溶液。另取 20ml 刻度试管 6 支，编号，1－5 管各加入不同浓度的α萘胺标准溶液 l ml，磷酸缓冲液 1 ml， 在第 6 支试管中，加蒸馏水 l ml，磷酸缓冲液 1ml，作为参比管。然后于每支试管中加入 10 ml 蒸馏水，1%对氨基苯磺酸 1 ml 和 100 ppm 的亚硝酸钠溶液 1ml ,混匀。置室温下 5 分钟使之显色，然后加蒸馏水定容至 20ml，摇匀,在 20－60 分钟内用 510 nm 波长下比色， 以参比管光密度为零，读取各管的光密度，将结果绘制标准曲线。 2．氯化三苯基四氮唑（TTC）法 （1）原理：氯化萘基唑（TTC）是标准氧化还原电位为 80 毫伏的氧化还原物质，溶于水 中为无色溶液，但还原后生成不溶于水的三苯基甲。生成的甲 呈稳定的红色，不会被空气 中的氧自动氧化。所以被广泛用作酶试验的受氢体。植物根引起的 TTC 还原，可因加入琥珀 酸、延胡索酸、苹果酸得到加强，而被丙二酸、碘乙酸所严重抑制，所以，它能够测定琥珀 α一萘胺氧化总量(µg)－ α-萘胺自发氧化量(µg) 反应时间×根鲜重 (根活力) (ug·h -1·g·FW-1 )
酸脱氢酶的活性。由该酶活性表示根系活力。 (2)方法步骤: ①TTC标淮曲线的制作: 吸取0.2m10.5%的TC标淮液放入10m1量瓶,加少许Na2S2O4粉末,摇匀后即产生红 色甲,再加乙酸乙酯10ml,摇匀。然后分别取此液0.25,0.50,1.00,1.50,2.00m1 置10m1量瓶中,以乙酸乙酯定容至刻度,即得到TTC0.025,0.05;0.10,0.15,0.20mg 的标准比色系列,以空白作参比,在485nm,光径1cm下测定光密度,绘制标准曲线。 ②称取样品0.5g,放入称量瓶,加λ0.4%TTC溶液和0.IM磷酸缓冲液的等量混合液 onl,把根充分浸在溶液中,在37℃下保温1小时,然后加入IM硫酸2ml终止反应。 ③把根取出,用粗滤纸吸干水分,投入研钵,加少量石英砂和乙酸乙酯硏碎,以提取 甲_,将红色乙酸乙酯提取液移入10ml量瓶中,并用少量乙酸乙酯洗残渣至白色,最后 用乙酸乙酯定容至10m1,以空白试验(先加入硫酸再加入根样品,其它手续同上)作对照, 在分光光度计上测定光密度(波长485nm),查标准曲线,求出TTC还原量 ④结果计算: TTC还原强度= IT℃还原量(克) 根量(g)×时间(小时) (3)仪器及试剂: 分光光度计 分析天平{托盘天平 4cm漏斗:1个 研钵:一套 量筒:10m11个 刻度移液管:0.5m11支,5m12支,2m1l3支。 容量瓶:10ml 高型称量瓶(30×60m):2个。 乙酸乙酯(分析纯) 连二亚硫酸钠(Na2S2O4)(保控粉)分析纯 1%TTC溶液:准确称取TC1.000克,溶于99m1水中,用时稀释至需要刻度 0.1M,p7.5磷酸缓冲液。 M硫酸:用量筒取比重为1.84的浓硫酸55.6m1,边搅拌边加入到盛有500m蒸馏水的 烧杯中,冷却后稀释至1000m1 (4)注意事项: ①每次测定的保温时间和温度要一致,否则各样品结果无可比性。 ②乙酸乙酯要分析纯,否则影响显色
酸脱氢酶的活性。由该酶活性表示根系活力。 （2）方法步骤： ①TTC 标淮曲线的制作： 吸取 0.2 ml 0.5％的 TTC 标淮液放入 10ml 量瓶，加少许 Na2S2O4 粉末，摇匀后即产生红 色甲 ，再加乙酸乙酯 10ml，摇匀。然后分别取此液 0.25，0.50，l.00，1.50，2.00 ml， 置 10 ml 量瓶中，以乙酸乙酯定容至刻度，即得到 TTC 0.025，0.05；0.10，0.15，0.20mg 的标准比色系列，以空白作参比，在 485nm，光径 1 cm 下测定光密度，绘制标准曲线 。 ②称取样品 0.5g，放入称量瓶，加入 0.4％TTC 溶液和 0.1M 磷酸缓冲液的等量混合液 l0ml，把根充分浸在溶液中，在 37℃下保温 1 小时，然后加入 1M 硫酸 2ml 终止反应。 ③把根取出，用粗滤纸吸干水分，投入研钵，加少量石英砂和乙酸乙酯研碎，以提取 甲 ，，将红色乙酸乙酯提取液移入 l0 ml 量瓶中, 并用少量乙酸乙酯洗残渣至白色，最后 用乙酸乙酯定容至 10ml，以空白试验（先加入硫酸再加入根样品，其它手续同上）作对照， 在分光光度计上测定光密度（波长 485nm），查标准曲线,求出 TTC 还原量。 ④结果计算： （3）仪器及试剂： 分光光度计。 分析天平｛托盘天平｝ 4cm 漏斗：l 个 研钵：一套 量筒： 10ml 1 个 刻度移液管：0.5ml l 支，5ml 2 支，2ml 3 支。 容量瓶：l0ml 高型称量瓶（30×60 mm）：2 个。 乙酸乙酯（分析纯） 连二亚硫酸钠（Na2S2O4）（保控粉）分析纯。 l％TTC 溶液：准确称取 TTC 1.000 克，溶于 99ml 水中，用时稀释至需要刻度。 0.1 M，pH 7.5 磷酸缓冲液。 lM 硫酸：用量筒取比重为 l.84 的浓硫酸 55.6 ml，边搅拌边加入到盛有 500ml 蒸馏水的 烧杯中，冷却后稀释至 1000ml. （4）注意事项： ①每次测定的保温时间和温度要一致，否则各样品结果无可比性。 ②乙酸乙酯要分析纯，否则影响显色。 TTC 还原强度= TTC 还原量（克） 根量（g）×时间（小时）