3、浓盐法 高浓度的盐可以破坏核酸和蛋白质之间的次级键,使核 蛋白解联。一般先用 I MNac1或MNaC10进行抽提,再加 入氯仿/异戊醇(起消泡作用),变性蛋白停留在水相及 氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,然后用2倍体积95% 乙醇可将DNA钠盐沉淀出来。该法对核酸的损伤较小, 但去除蛋白不够彻底,常与其它方法结合使用。 如经高氯酸钠处理后,采用CSCl密度梯度离心,便可将 蛋白全部去除
3、浓盐法: 高浓度的盐可以破坏核酸和蛋白质之间的次级键，使核 蛋白解联。一般先用1MNaCl或1MNaClO4进行抽提，再加 入氯仿/异戊醇（起消泡作用），变性蛋白停留在水相及 氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，然后用2倍体积95% 乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。该法对核酸的损伤较小， 但去除蛋白不够彻底，常与其它方法结合使用。 如经高氯酸钠处理后，采用CsCl密度梯度离心，便可将 蛋白全部去除
4、高通量的RNA分离技术 (1)微量移液法借助毛细管或微量 → 移液管直接提取细胞的内含物,进行 RNA的抽提。 (2)激光微解剖法将被冷冻或被石 蜡包埋的组织切成薄片,然后所需部位 被激光解剖下来,再利用黏膜吸附,转 移到RNA提取液。 (3)原生质体分离法此法首先将荧 光蛋白(GFP)转入受体细胞,用酶处 理破壁后,通过紫外照射使那些表达绿 色荧光蛋白的细胞产生荧光,再通过荧 回光感受分离仪将其分离出来,进而制得
4、高通量的RNA分离技术: （1）微量移液法 借助毛细管或微量 移液管直接提取细胞的内含物，进行 RNA的抽提。 （2）激光微解剖法 将被冷冻或被石 蜡包埋的组织切成薄片，然后所需部位 被激光解剖下来，再利用黏膜吸附，转 移到RNA提取液。 （3）原生质体分离法 此法首先将荧 光蛋白（GFP）转入受体细胞，用酶处 理破壁后，通过紫外照射使那些表达绿 色荧光蛋白的细胞产生荧光，再通过荧 光感受分离仪将其分离出来，进而制得 RNA
(三)核酸的浓缩和沉淀 核酸的浓缩 DNA含量低且容积大时,需浓缩 (1)真空干燥法此法比较温和,适用于小量样品的浓缩 (2)丁醇抽提浓缩法丁醇能吸收大量水,而DNA不溶于 丁醇。 (3)聚乙二醇(PEG)吸收沉淀法。将DA溶液装入透析袋 ,包埋在PEG中,PEG吸水液化,DNA溶液体积减小
（三） 核酸的浓缩和沉淀 1、核酸的浓缩 DNA含量低且容积大时，需浓缩。 （1）真空干燥法 此法比较温和，适用于小量样品的浓缩 （2）丁醇抽提浓缩法 丁醇能吸收大量水，而DNA不溶于 丁醇。 （3）聚乙二醇（PEG）吸收沉淀法。 将DNA溶液装入透析袋 ，包埋在PEG中，PEG吸水液化，DNA溶液体积减小
、核酸的沉淀 核酸是多聚阴阳离子的水溶性化合物,它与钠、钾、鎂 形成的盐在多种有机溶剂中不溶解,也不会变性。 1)常用于沉淀核酸的盐类:NaAC,NaCl,KAC,MgCl2 等 (②)沉淀核酸的有机溶剂:乙醇,异丙醇,PEG等 (3)离心
2、核酸的沉淀 核酸是多聚阴阳离子的水溶性化合物，它与钠、钾、鎂 形成的盐在多种有机溶剂中不溶解，也不会变性。 （1）常用于沉淀核酸的盐类： NaAC，NaCl，KAC，MgCl2 等。 （2）沉淀核酸的有机溶剂： 乙醇，异丙醇，PEG等。 （3）离心
(四)核酸的纯化 核酸纯化的方法很多,如酚/氯仿抽提法、超速离心、 柱层析、免疫沉淀、凝胶电泳等。 园 柱层析法 以硅基质作为填充层析柱的树脂,DNA在高 盐的条件下,DNA的磷酸二酯骨架脱水,通 过暴露的磷酸盐残基与硅基质结合,而蛋 白等杂质不能结合到柱上,可用75%的乙醇 洗去杂质;而在低盐条件下,DNA又可从柱 子上释放处理,所以可通过再加入TE或水 离心洗脱
（四） 核酸的纯化 核酸纯化的方法很多，如酚/氯仿抽提法、超速离心、 柱层析、免疫沉淀、凝胶电泳等。 柱层析法 以硅基质作为填充层析柱的树脂，DNA在高 盐的条件下，DNA的磷酸二酯骨架脱水，通 过暴露的磷酸盐残基与硅基质结合，而蛋 白等杂质不能结合到柱上，可用75%的乙醇 洗去杂质；而在低盐条件下，DNA又可从柱 子上释放处理，所以可通过再加入TE或水 ，离心洗脱