1.质粒( plasmid) 质粒是存在于细胞 染色体外的小型双链 DNA分子2-200Kb之 质粒 间本身含有复制功能 细菌染色体 的遗传结构能在宿主 细胞独立自主进行复制 并在细胞分裂时保持 恒定地传给子代细胞 特点 能在宿主细胞内独立自主复制;带有某些遗传信息, 会赋予宿主细胞一些遗传性状。 缺点:该载体一般只能接受小于15kb的外源DNA片段插入 过大会导致重组体扩增减慢,甚至插入片段先进丢失
1. 质粒 (plasmid) 特点 能在宿主细胞内独立自主复制；带有某些遗传信息, 会赋予宿主细胞一些遗传性状。 质粒是存在于细胞 染色体外的小型双链 DNA分子,2-200Kb之 间.本身含有复制功能 的遗传结构,能在宿主 细胞独立自主进行复制, 并在细胞分裂时,保持 恒定地传给子代细胞. 缺点:该载体一般只能接受小于15kb的外源DNA片段.插入 过大,会导致重组体扩增减慢,甚至插入片段先进丢失
质粒载体-pBR322 43kb多拷贝松弛型,内含一个(Or)、一个抗氨 苄青霉素(Ampr)和一个抗四环素(Tetr)标记 基因,在Ampr中有两个内切酶位点(PstI、PvuI), 在Ter中有三个内切酶位点( ECoRV、BamH Sall)
质粒载体--pBR322 4.3kb多拷贝松弛型，内含一个（Ori)、一个抗氨 苄青霉素（Ampr ）和一个抗四环素（Tetr ）标记 基因，在Ampr 中有两个内切酶位点（PstI、PvuI)， 在Tetr 中有三个内切酶位点（EcoRV、BamHI、 SalI)
Cla I 23 Lco RI4361 HidⅢ2 4atI4286 EcoRv185 scalI 3846 Ban 375 Pun I 3735 Sph I 562 PstI 3609 SalI 651 A Tc Xna Ill939 NruI 972 pBR322 63碱基对) Awa I 1425 复制起始∑ BalI 1444 JⅢ2475 Puu II 2066 eI2297 ThⅢI2219 Sna i 2246 FBR质粒的物理图谱回
目 录
PUC系列质粒是由pBR322质粒中的氨苄青抗性基因、 复制起始点与大肠杆菌acz基因片段改建而成的 Taq I 外源基因插入位点 Sal i sal i Hae/ puc 7: Eco RI, Bam Hl, Acc I, Pt I, Acc I, Bam Hl, Eco RI, Hae m Hinch Hlinc lI pUCc如 SmaI pUC: 8: EcoRl, Bam HI, AccI, PstI, Hind Hae l XanI Hinche T Hae Ⅱ sali Smal hae taI pUc9:HidⅢ,Bsl,Acl, BamHi,,EoRI,HaeⅢ Hinch Xmal pUC系列质粒的物理图谐
PUC系列质粒是由pBR322质粒中的氨苄青抗性基因、 复制起始点与大肠杆菌lacZ基因片段改建而成的
标记基因的种类 1抗性标记基因 a.抗生素抗性基因:Ap,Ter,Kanr, b.重金属抗性基因:Cur,Znr,Cdr c.代谢抗性基因:抗除草剂基因 2)营养标记基因 主要是参与氨基酸,核苷酸及其他必需菅养物合 成酶类的基因,这类基因在酵母转化中使用最频繁, 如TRP1,URA3,LEU2,HIS4等
1）抗性标记基因 a. 抗生素抗性基因: Apr ，Tc r ，Kanr， b. 重金属抗性基因: Cur ，Znr ，Cd r c. 代谢抗性基因: 抗除草剂基因 2）营养标记基因 主要是参与氨基酸，核苷酸及其他必需营养物合 成酶类的基因， 这类基因在酵母转化中使用最频繁， 如TRP1，URA3，LEU2，HIS4等。 标记基因的种类