同尾酶 有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相 同,但切割DNA后,产生相同的粘性末端,称 为同尾酶。 BamH I Bgll: GGATCC AGATCT CCTAGG TCTAGA CCTAG GATCC G GATCT G TCTAG
有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相 同，但切割DNA后，产生相同的粘性末端，称 为同尾酶。 同尾酶 GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G A TCTAG GATCT A
远距离裂解酶 这种酶识别位点与切割位点不一致,但其 切割与识别位点距离是一定的,一般为10个碱 基 可变酶 它们的识别序列中1个或几个核苷酸是可变 的。一般识别序列大于6个碱基
这种酶识别位点与切割位点不一致，但其 切割与识别位点距离是一定的，一般为10个碱 基。 远距离裂解酶 可变酶 它们的识别序列中1个或几个核苷酸是可变 的。一般识别序列大于6个碱基
Ⅱ类限制性内切酶操作注意事项 1、防止污染,限制酶的量不应超过总量的 10%。 2、整个操作过程在0℃进行,一般总是加 完其他试剂后,最后加酶 3、酶应分装成小份存储。 4、当DNA需要两种以上的酶切时,最好是 使用同种缓冲液
Ⅱ类限制性内切酶操作注意事项 1、防止污染，限制酶的量不应超过总量的 10%。 2、整个操作过程在0℃进行，一般总是加 完其他试剂后，最后加酶。 3、酶应分装成小份存储。 4、当DNA需要两种以上的酶切时，最好是 使用同种缓冲液
(二)重组DNA技术中常用的工具酶 工具酶 功 能 限制性核酸内切酶识别特异序列,切割DNA DNA连接酶催化DNA中相邻的5′磷酸基和3羟基末端之间形成磷酸 二酯键,使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接 DNA聚合酶I|@合成双链cDNA分子或片段连接 ②缺口平移制作高比活探针 DNA序列分析 ④填补3′末端 Klenow片段又名DNA聚合酶大片段,具有完整DNA聚合酶的5→3 聚合、3′-5外切活性,而无5→3外切活性。常用于 cDNA第二链合成,双链DNA3末端标记等 反转录酶合成cDNA ②替代DNA聚合酶I进行填补,标记或DNA序列分析 多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5'羟基末端磷酸化,或标记探针 末端转移酶在3羟基末端进行同质多聚物加尾 碱性磷酸酶切除末端磷酸基
(二)重组DNA技术中常用的工具酶 工 具 酶 功 能 限制性核酸内切酶 识别特异序列，切割DNA DNA连接酶 催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸 二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接 DNA聚合酶Ⅰ ① 合成双链cDNA分子或片段连接 ② 缺口平移制作高比活探针 ③ DNA序列分析 ④ 填补3´末端 Klenow片段 又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53 聚合、35外切活性，而无53外切活性。常用于 cDNA第二链合成，双链DNA 3末端标记等 反转录酶 ① 合成cDNA ② 替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化，或标记探针 末端转移酶 在3´羟基末端进行同质多聚物加尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基
基因克隆需要特定DNA载体 载体是携带靶DNA片段进入宿主细胞,进行扩增和表达 的工具。其本质是DNA。用于克隆和扩增特定的DNA片段的 载体称克隆载体,用于表达外源基因的称为表达载体。 载体应具备以下特征: 1.至少有一个复制起点,因而至少可在一种生物体中自主复 制。 2.至少应有一个克隆位点,以供外源DNA插入。 3.至少应有一个遗传标记基因,以指示载体或重组DNA分子 是否进入宿主细胞
基因克隆需要特定DNA载体 载体是携带靶DNA片段进入宿主细胞，进行扩增和表达 的工具。其本质是DNA。用于克隆和扩增特定的DNA片段的 载体称克隆载体，用于表达外源基因的称为表达载体。 载体应具备以下特征： 1. 至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复 制。 2. 至少应有一个克隆位点，以供外源DNA插入。 3. 至少应有一个遗传标记基因，以指示载体或重组DNA分子 是否进入宿主细胞