DNA聚合酶I E.Coli DNA聚合酶I(DNA pol I)是一个具有 3种酶活性的多功能性酶。 包括： 5′→3′DNA聚合酶活性 5→3核酸外切酶活性 3·→5·核酸外切酶活性
㈠ DNA聚合酶Ⅰ E.Coli DNA聚合酶Ⅰ（DNA pol Ⅰ） 是一个具有 3 种酶活性的多功能性酶。 包括： 5ˊ →3ˊDNA 聚合酶活性 5ˊ →3ˊ核酸外切酶活性 3ˊ →5ˊ核酸外切酶活性
DNA po1I应用 (1) 催化DNA缺口平移反应，制备高比活性DNA 探针； (2) 第二条cDNA链的合成； 对DNA3’突出末端进行标记； (4) DNA序列分析
DNA pol Ⅰ应用 ⑴ 催化DNA缺口平移反应，制备高比活性DNA 探针； ⑵ 第二条cDNA链的合成； ⑶ 对DNA3’突出末端进行标记； ⑷ DNA序列分析
E.coli DNA pol.I催化切口平移 3 M 3 dATP,dCTP,dG TP E.co∥DNAP [a -32P]dTTP
E. coli DNA pol. Ⅰ催化切口平移 * T * T * T * T M g 2 + D N a s e I 5 ' 3 ' 3 ' 5 ' 5 ' 3 ' 5 ' 3 ' 3 ' 5 ' 5 ' 3 ' 3 ' 5 ' 5 ' 3 ' 3 ' 5 ' d A T P ,d C T P ,d G T P [α - 3 2 P ]d T T P E . c o l i D N A P O L I
Klenow片段(DNA po1.大片断) 36kD 76kD N C大肠杆菌DNA聚合酶 53'外切酶 53'聚合酶35外切酶 用枯草杆菌蛋白酶裂解全酶 N C Klenow片段 5→3′聚合酶3+5外切酶 图17-1Kew片段
㈡ Klenow片段（DNA pol.大片断）
K1enow片段用途 (I)补齐双链DNA的 53 3 双链DNA 3末端； 外切酶川 (2)用标记碱基补 3 5粘端 齐3末端； 3 Kenow DNA聚合酶 a-32P]dNTP (3) 在cDNA克隆中， 5 3 标记末端 用于第二股链 3 5 变性 的合成； 3 (4)DNA序列分析。 + 标记探针 3 5
Klenow片段用途 ⑴ 补齐双链DNA的 3ˊ末端； ⑵ 用标记碱基补 齐3ˊ末端 ； Klenow DNA聚合酶 [ - α32P]dNTP 双链DNA 5'-粘端 外切酶Ⅲ 变性 + 5' 3' 3' 5' 3' 5' 3' 5' 3' 3' 5' 5' 5' 3' 5' 3' 标记探针 标记末端 ⑶ 在cDNA克隆中， 用于第二股链 的合成； ⑷ DNA序列分析