四、广谱实验法 在广谱实验法中,把培养基中所有组分分为4大类:无 机盐、有机营养物质(蔗糖、氨基酸和肌醇等)、生长素 细胞分裂素。对每一类物质选定低(L)、中(M)、和高 (H)3个浓度。4类物质各3种浓度的自由组合即构成了 项包括81个处理的实验。在这81个处理中最好 可用4个字母表示。例如,一个包含中等浓度无机盐, 低等浓度生长素、中等浓度细胞分裂素和高等浓度有 机营养物质的处理即可表示为MLMH。达到这个阶段 再试用不同类型的生长素和细胞分裂素即可找到培养 基的最佳配方。这是因为不同类型的生K素和细胞分裂 素对不同植物的活性有所不同
四、广谱实验法 • 在广谱实验法中，把培养基中所有组分分为4大类：无 机盐、有机营养物质(蔗糖、氨基酸和肌醇等)、生长素、 细胞分裂素。对每一类物质选定低(L)、中(M)、和高 (H)3个浓度。4类物质各3种浓度的自由组合即构成了 一项包括81个处理的实验。在这81个处理中最好的一 个可用4个字母表示。例如，一个包含中等浓度无机盐， 低等浓度生长素、中等浓度细胞分裂素和高等浓度有 机营养物质的处理即可表示为MLMH。达到这个阶段， 再试用不同类型的生长素和细胞分裂素即可找到培养 基的最佳配方。这是因为不同类型的生K素和细胞分裂 素对不同植物的活性有所不同
第四章操作技术 第一节灭菌和接种 ·灭菌是组织培养重要的工作之一。初学者首先要清楚 有菌和无菌的范畴。有菌的范畴是:凡是暴露在空气 中的物体,接触自然水源的物体,至少它的表面都是 有菌的。依此观点,无菌室等未经处理的地方、超净 表面、简单煮沸的培养基、我们使用的刀、剪在未 处理之前、我们身体的整个外表及与外界相连的内表 如整个消化道、呼吸道,即我们呼出的气体、培养容 器无论洗得多干净等等都是有菌的。 这里所指的菌,包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其 他微生物。茵的特点是:极小,肉眼看不见。无处不 在,无时不有,无孔不人。在自然条件下忍耐力强, 生活条件要求简单,繁殖力极强,条件适宜时便可大 量滋生
第四章 操作技术 第一节 灭菌和接种 • 灭菌是组织培养重要的工作之一。初学者首先要清楚 有菌和无菌的范畴。有菌的范畴是：凡是暴露在空气 中的物体，接触自然水源的物体，至少它的表面都是 有菌的。依此观点，无菌室等未经处理的地方、超净 台表面、简单煮沸的培养基、我们使用的刀、剪在未 处理之前、我们身体的整个外表及与外界相连的内表， 如整个消化道、呼吸道，即我们呼出的气体、培养容 器无论洗得多干净等等都是有菌的。 • 这里所指的菌，包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其 他微生物。茵的特点是：极小，肉眼看不见。无处不 在，无时不有，无孔不人。在自然条件下忍耐力强， 生活条件要求简单，繁殖力极强，条件适宜时便可大 量滋生
无菌的范畴是:经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体,经 其他物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法 必须已经证明是有效的),高层大气、岩石内部、健康的动 植物的不与外部接触的组织内部,强酸强碱,化学元素灭菌 剂等表面和内部等等都是无菌的。从以上可以看出:在地球 表面无菌世界要比有菌世界小得多 菌是指用物理或化学的方法,杀死物体表面和孔隙内的一切 微生物或生物体,即把所有生命的物质全部杀死。与此相关 的一个概念是消毒,它指杀死、消除或充分抑制部分徼生物 使之不再发生危害作用,显然经过消毒,许多细菌芽孢、霉 菌的厚垣孢子等不会完全杀死,即由于在消毒后的环境里和 物品上还有活着的微生物,所以通过严格灭菌的操作空间 (接种室、超净台、等)和使用的器皿,以及操作者的衣着和 手都不带任何活着的微生物。在这样的条件下进行的操作, 就叫做无菌操作
• 无菌的范畴是：经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体，经 其他物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法 必须已经证明是有效的)，高层大气、岩石内部、健康的动、 植物的不与外部接触的组织内部，强酸强碱，化学元素灭菌 剂等表面和内部等等都是无菌的。从以上可以看出：在地球 表面无菌世界要比有菌世界小得多。 • 菌是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切 微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。与此相关 的一个概念是消毒，它指杀死、消除或充分抑制部分微生物， 使之不再发生危害作用，显然经过消毒，许多细菌芽孢、霉 菌的厚垣孢子等不会完全杀死，即由于在消毒后的环境里和 物品上还有活着的微生物，所以通过严格灭菌的操作空间 (接种室、超净台、等)和使用的器皿，以及操作者的衣着和 手都不带任何活着的微生物。在这样的条件下进行的操作， 就叫做无菌操作
常用的灭菌方法 常用的灭菌方法可分为物理的和化学的 两类,即:物理方法如干热(烘烧和灼烧) 湿热(常压或髙压蒸煮)、射线处理(紫外 线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量 无菌水冲洗等措施;化学方法是使用升 汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏 儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精 化学药品处理。这些方法和药剂要根据 工作中的不同材料不同目的适当选用
常用的灭菌方法 • 常用的灭菌方法可分为物理的和化学的 两类，即：物理方法如干热(烘烧和灼烧)、 湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外 线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量 无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升 汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏 儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精 化学药品处理。这些方法和药剂要根据 工作中的不同材料不同目的适当选用
湿热灭菌(培养基) 培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。高压灭菌的原 理是:在密闭的蒸锅内,其中的蒸气不能外溢,压力 不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随 之增加。在o.1MPa的压力下,锅内温度达121℃。在 此蒸气温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热 的芽孢。 ·注意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌 才能彻底。高压灭菌放气有几种不同的做法,但目的 都是要排净空气,使锅内均匀升温,保证灭菌彻底 常用方法是:关闭放气阀,通电后,待压力上升到 O.05MPa时,打开放气阀,放出 待压力表指针 归零后,再关闭放气阀。关阀再通电后,压力表上升 达到0.1MPa时压力0.1-0.15MPa,20min
湿热灭菌（培养基） • 培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。高压灭菌的原 理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸气不能外溢，压力 不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随 之增加。在o．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在 此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热 的芽孢。 • 注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌 才能彻底。高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的 都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。 常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到 O．05MPa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针 归零后，再关闭放气阀。关阀再通电后，压力表上升 达到0．1MPa时压力0．1-0．15MPa，20min