(2)1%人血清白蛋白(HAS)孵育10min (亦可用10%正常羊血清代之),不洗。 (3)抗ACTH血清(McAb)1:200,孵育 30min37℃,湿盒 (4)0.05 MOVL TBS(pH74,内含1% Writen 100,下同)洗,10min×3
(2)1％人血清白蛋白（HAS）孵育10min （亦可用10％正常羊血清代之），不洗。 (3)抗ACTH血清（McAb）1:200，孵育 30min 37℃，湿盒。 (4)0.05mol/L TBS(pH7.4,内含1％Triten× 100,下同)洗，10min×3
(5)羊抗鼠IgG- TRITO1:100,湿盒,室温 避光反应1h (6)0.05mo/LTBS(pH74)洗,10min×3 第一重 ACTH-TRITO标记染色已完成)
(5)羊抗鼠IgG-TRITC 1:100，湿盒，室温 避光反应1h。 (6)0.05mol/L TBS(pH7.4)洗，10min×3， (第一重ACTH-TRITC标记染色已完成)
(⑦)切片逐级酒精脱水,二甲苯透明,空气 干燥后,置于装有多聚甲醛粉末的密闭容 器内,放在80℃烤箱或温箱内以甲醛蒸气 固定2~4h,使第一重染色中二抗的抗原 结合部位失活。 (8)切片以TBS洗,5min×4
(7)切片逐级酒精脱水，二甲苯透明，空气 干燥后，置于装有多聚甲醛粉末的密闭容 器内，放在80℃烤箱或温箱内以甲醛蒸气 固定2～4h，使第一重染色中二抗的抗原 结合部位失活。 (8)切片以TBS洗，5min×4
(9)1%HA(或10%正羊血清)孵育 30min,室温,湿盒,不洗。 (10抗GH血清(McAb)1:400,孵育30min, 37℃,湿盒。 (11)0.05 MOVLTBS(pH74)洗,10min×3
(9)1％ HSA（或10％正羊血清）孵育 30min，室温，湿盒，不洗。 (10)抗GH血清(McAb) 1:400，孵育30min， 37℃，湿盒。 (11)0.05mol/L TBS(pH7.4)洗，10min×3