位、重排,而使化合物的颜色加深。但-OH、一0CH3,引入其他位置则影响较小。 花色素及其苷元的颜色随p不同而改变,一般显红(pH<7)、紫(pH=8.5)蓝 (pH>8.5)等颜色。 、溶解性 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态(苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷)不同 而有很大差异。一般游离苷元难溶或不溶于水,易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醇等有机 溶剂及稀碱水溶液中。其中黄酮、黄酮醇、查耳酮等平面性强的分子,因分子与分子间排列 紧密,分子间引力较大,故更难溶于水;而二氢黄酮及二氢黄酮醇等,因系非平面性分子, 故分子与分子间排列不紧密,分子间引力降低,有利于水分子进入,溶解度稍大。 至于花色苷元(花青素)类虽也为平面性结构,但因以离子形式存在,具有盐的通性, 故亲水性较强,水中溶解度较大。 黄酮类苷元分子中引入羟基,将增加在水中的溶解度:而羟基经甲基化后,则增加在有 机溶剂中的溶解度。例如,一般黄酮类化合物不溶于石油醚中,故可与脂溶性杂质分开,但 川陈皮素(5,6,7,8,3’,4’一六甲氧基黄酮)却可溶于石油醚 黄酮类化合物的羟基糖苷化后,水中溶解度即相应加大,而在有机溶剂中的溶解度则相 应减小。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中:但难溶或不溶于苯、氯仿等有 机溶剂中。糖链越长,则水中溶解度越大 另外,糖的结合位置不同,对苷的水中溶解度也有一定影响:以棉黄素(3,5,7,8, 3’,4’一六羟基黄酮)为例,其3一0一葡萄糖苷的水中溶解度大于7一0—葡萄糖苷。 三、酸性与碱性 (一)酸性 黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基,故显酸性,可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及 甲基甲酰胺中 由于酚羟基数目及位置不同,酸性强弱也不同,以黄酮为例,其酚羟基酸性强弱顺序依 次为 7,4’一二羟基>7或4'一羟基>一般酚羟基>5—羟基 例如C-Ⅷ因为处于C=0的对位,在p一共轭效应的影响下,酸性较强,可溶于碳酸 钠水溶液中,此性质可用于提取、分离及鉴定工作 (二)碱性 7一吡喃环上的1位氧原子,因有未共用的电子对,故表现微弱的碱性,可与强无机酸, 如浓硫酸、盐酸等生成盐,但生成的样盐极不稳定,加水后即可分解。 黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的样盐,常常表现出特殊的颜色,可用于鉴别。某些甲 氧基黄酮溶于浓盐酸中显深黄色,且可与生物碱沉淀试剂生成沉淀。 四、显色反应 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及γ~吡喃酮环有关 (一)还原试验 1.盐酸一镁粉(或锌粉)反应这是鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应。方法是将 样品溶于1.0m1甲醇或乙醇中,加入少许镁粉(或锌粉)振摇,滴加几滴浓盐酸,1~2min 内(必要时微热)即可显色。多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红至 紫红色。少数显紫至蓝色,当B环上有一或一0CH3取代时,呈现的颜色随之加深。但查 耳酮、橙酮、儿茶素类则无该显色反应。异黄酮类除少数例外,也不显色 由于花青素及部分橙酮、查耳酮等在单纯浓盐酸中也会发生色变,故须预先作空白对照 实验(在供试液中仅加入浓盐酸进行观察)。 另外,在用植物粗提取液进行预试时,为了避免提取液本身颜色的干扰,可注意观察加
位、重排，而使化合物的颜色加深。但－OH、－OCH3，引入其他位置则影响较小。 花色素及其苷元的颜色随 pH 不同而改变，一般显红（ pH ＜ 7）、紫（ pH＝ 8．5）蓝 （ pH＞ 8．5）等颜色。 二、溶解性 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同 而有很大差异。一般游离苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醇等有机 溶剂及稀碱水溶液中。其中黄酮、黄酮醇、查耳酮等平面性强的分子，因分子与分子间排列 紧密，分子间引力较大，故更难溶于水；而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面性分子， 故分子与分子间排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，溶解度稍大。 至于花色苷元（花青素）类虽也为平面性结构，但因以离子形式存在，具有盐的通性， 故亲水性较强，水中溶解度较大。 黄酮类苷元分子中引入羟基，将增加在水中的溶解度；而羟基经甲基化后，则增加在有 机溶剂中的溶解度。例如，一般黄酮类化合物不溶于石油醚中，故可与脂溶性杂质分开，但 川陈皮素（5，6，7，8，3’，4’－六甲氧基黄酮）却可溶于石油醚。 黄酮类化合物的羟基糖苷化后，水中溶解度即相应加大，而在有机溶剂中的溶解度则相 应减小。黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中；但难溶或不溶于苯、氯仿等有 机溶剂中。糖链越长，则水中溶解度越大。 另外，糖的结合位置不同，对苷的水中溶解度也有一定影响：以棉黄素（3，5，7，8， 3’，4’－六羟基黄酮）为例，其 3－O－葡萄糖苷的水中溶解度大于 7－O－葡萄糖苷。 三、酸性与碱性 （一）酸性 黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及 二甲基甲酰胺中。 由于酚羟基数目及位置不同，酸性强弱也不同，以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序依 次为： 7，4’－二羟基＞7 或 4'－羟基＞一般酚羟基＞5－羟基 例如 C7－OH 因为处于 C＝O 的对位，在 p－共轭效应的影响下，酸性较强，可溶于碳酸 钠水溶液中，此性质可用于提取、分离及鉴定工作。 （二）碱性 7－吡喃环上的 1 位氧原子，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸， 如浓硫酸、盐酸等生成盐，但生成的样盐极不稳定，加水后即可分解。 黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的样盐，常常表现出特殊的颜色，可用于鉴别。某些甲 氧基黄酮溶于浓盐酸中显深黄色，且可与生物碱沉淀试剂生成沉淀。 四、显色反应 黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及 γ～吡喃酮环有关。 （一）还原试验 1．盐酸－镁粉（或锌粉）反应 这是鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应。方法是将 样品溶于 1．0 ml 甲醇或乙醇中，加入少许镁粉（或锌粉）振摇，滴加几滴浓盐酸，1～2 min 内（必要时微热）即可显色。多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红至 紫红色。少数显紫至蓝色，当 B 环上有－OH 或－OCH3 取代时，呈现的颜色随之加深。但查 耳酮、橙酮、儿茶素类则无该显色反应。异黄酮类除少数例外，也不显色。 由于花青素及部分橙酮、查耳酮等在单纯浓盐酸中也会发生色变，故须预先作空白对照 实验（在供试液中仅加入浓盐酸进行观察）。 另外，在用植物粗提取液进行预试时，为了避免提取液本身颜色的干扰，可注意观察加
入浓盐酸后升起的泡沫颜色。如泡沫为红色,即示阳性 盐酸一镁粉反应的机理过去解释为由于生成了花色苷元所致,现在认为是因为生成了阳 碳离子缘故 2.四氢硼钠(钾)反应NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂。 与二氢黄酮类化合物产生红至紫色。其他黄酮类化合物均不显色,可与之区别。方法是 在试管中加入0.1ml含有样品的乙醇液,再加等量2%NaBH4的甲醇液,1min后,加浓盐 酸或浓硫酸数滴,生成紫色至紫红色。 另外,近来报道二氢黄酮可与磷钼酸试剂反应呈现棕褐色,也可作为二氢黄酮类化合物 的特征鉴别反应 (二)金属盐类试剂的络合反应 黄酮类化合物中常含有下列结构单元,故常可与铝盐、铅盐、诸盐、镁盐等试剂反应, 生成有色络合物 1.铝盐常用试剂为1%三氯化铝或硝酸铝溶液。生成的络合物多为黄色,并有荧光, 可用于定性及定量分析 2.铅盐常用工%醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液,可生成黄至红色沉淀。 黄酮类化合物与铅盐生成沉淀的色泽,因羟基数目及位置不同而异。其中,醋酸铅只能 与分子中具有邻二酚羟基或兼有3一羟基、4一酮基或5一羟基、4一酮基结构的化合物反应 生成沉淀。但碱式醋酸铅的沉淀能力要大得多,一般酚类化合物均可与其发生沉淀,依此不 仅可用于鉴定,也可用于提取及分离工作。 3.锆盐多用2%二氯氧锆甲醇溶液黄酮类化合物分子中有游离的3一或5一羟基存 在时,均可与该试剂反应生成黄色的锆络合物。但两种锆络合物对酸的稳定性不同。3一羟 基,4一酮基络合物的稳定性比5一羟基,4一酮基络合物的稳定性强(仅二氢黄酮醇除外) 故当反应液中接着加入枸椽酸后,5一羟基黄酮的黄色溶液显著褪色,而3一羟基黄酮溶液 仍呈鲜黄色(锆一枸椽酸反应)。方法是取样品0.5~1.0ng,用10.0ml甲醇加热溶解, 加1.0ml2%二氯氧锆( Zrocl2)甲醇液,呈黄色后再加入2%枸椽酸甲醇溶液,观察颜色 变化 上述反应也可在纸上进行,得到的锆盐络合物多呈黄绿色,并带荧光 4.镁盐常用醋酸镁甲醇溶液为显色剂,本反应可在纸上进行。试验时在纸上滴加 一滴供试液,喷以醋酸镁的甲醇溶液,加热干燥,在紫外光灯下观察。二氢黄酮、二氢 黄酮醇类可显天蓝色荧光,若具有C3-OH,色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则 显黄一橙黄一褐色。 5.氯化锶(SrCl2) 在氨性甲醇溶液中,氯化锶可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色至 棕色乃至黑色沉淀 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物与SrCl2的反应试验时,取约1.0m检品置小试管中 加入1.0ml甲醇使溶(必要时可在水浴上加热),加入3滴0.01mol/L。氯化铝的甲醇溶 液,再加3滴已用氨蒸气饱和的甲醇溶液,注意观察有无沉淀生成 6.三氯化铁三氯化铁水溶液或醇溶液为常用的酚类显色剂。多数黄酮类化合物因分 子中含有酚羟基,故可产生阳性反应,但一般仅在含有氢键缔合的酚羟基时,才呈现明显反 (三)硼酸显色反应 当黄酮类化合物分子中有下列结构时,在无机酸或有机酸存在条件下,可与硼酸反应, 生成亮黄色。显然,5一羟基黄酮及2一羟基査耳酮类结构可以满足上述要求,故可与其他 类型区别。一般在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光,但在枸椽酸丙酮存在的条件下,则只
入浓盐酸后升起的泡沫颜色。如泡沫为红色，即示阳性。 盐酸－镁粉反应的机理过去解释为由于生成了花色苷元所致，现在认为是因为生成了阳 碳离子缘故。 2．四氢硼钠（钾）反应 NaBH4 是对二氢黄酮类化合物专属性较高的一种还原剂。 与二氢黄酮类化合物产生红至紫色。其他黄酮类化合物均不显色，可与之区别。方法是 在试管中加入 0.1ml 含有样品的乙醇液，再加等量 2％ NaBH4 的甲醇液，lmin 后，加浓盐 酸或浓硫酸数滴，生成紫色至紫红色。 另外，近来报道二氢黄酮可与磷钼酸试剂反应呈现棕褐色，也可作为二氢黄酮类化合物 的特征鉴别反应。 （二）金属盐类试剂的络合反应 黄酮类化合物中常含有下列结构单元，故常可与铝盐、铅盐、诸盐、镁盐等试剂反应， 生成有色络合物。 1．铝盐 常用试剂为 1％三氯化铝或硝酸铝溶液。生成的络合物多为黄色，并有荧光， 可用于定性及定量分析。 2．铅盐 常用工％醋酸铅及碱式醋酸铅水溶液，可生成黄至红色沉淀。 黄酮类化合物与铅盐生成沉淀的色泽，因羟基数目及位置不同而异。其中，醋酸铅只能 与分子中具有邻二酚羟基或兼有 3－羟基、4－酮基或 5－羟基、4－酮基结构的化合物反应 生成沉淀。但碱式醋酸铅的沉淀能力要大得多，一般酚类化合物均可与其发生沉淀，依此不 仅可用于鉴定，也可用于提取及分离工作。 3．锆盐 多用 2％二氯氧锆甲醇溶液 黄酮类化合物分子中有游离的 3－或 5－羟基存 在时，均可与该试剂反应生成黄色的锆络合物。但两种锆络合物对酸的稳定性不同。3－羟 基，4－酮基络合物的稳定性比 5－羟基，4－酮基络合物的稳定性强（仅二氢黄酮醇除外） 故当反应液中接着加入枸椽酸后，5－羟基黄酮的黄色溶液显著褪色，而 3－羟基黄酮溶液 仍呈鲜黄色（锆－枸椽酸反应）。方法是取样品 0.5～1.0 mg，用 10.0 ml 甲醇加热溶解， 加 1.0ml2％二氯氧锆（ ZrOCl2）甲醇液，呈黄色后再加入 2％枸椽酸甲醇溶液，观察颜色 变化。 上述反应也可在纸上进行，得到的锆盐络合物多呈黄绿色，并带荧光。 4．镁盐 常用醋酸镁甲醇溶液为显色剂，本反应可在纸上进行。试验时在纸上滴加 一滴供试液，喷以醋酸镁的甲醇溶液，加热干燥，在紫外光灯下观察。二氢黄酮、二氢 黄酮醇类可显天蓝色荧光，若具有 C3-OH，色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则 显黄－橙黄－褐色。 5．氯化锶（SrCl2） 在氨性甲醇溶液中，氯化锶可与分子中具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物生成绿色至 棕色乃至黑色沉淀。 具有邻二酚羟基的黄酮类化合物与 SrCl2 的反应试验时，取约 1.0 mg 检品置小试管中， 加入 1.0 ml 甲醇使溶（必要时可在水浴上加热），加入 3 滴 0.01 mol／L。氯化铝的甲醇溶 液，再加 3 滴已用氨蒸气饱和的甲醇溶液，注意观察有无沉淀生成。 6．三氯化铁 三氯化铁水溶液或醇溶液为常用的酚类显色剂。多数黄酮类化合物因分 子中含有酚羟基，故可产生阳性反应，但一般仅在含有氢键缔合的酚羟基时，才呈现明显反 应。 （三）硼酸显色反应 当黄酮类化合物分子中有下列结构时，在无机酸或有机酸存在条件下，可与硼酸反应， 生成亮黄色。显然，5－羟基黄酮及 2－羟基查耳酮类结构可以满足上述要求，故可与其他 类型区别。一般在草酸存在下显黄色并具有绿色荧光，但在枸椽酸丙酮存在的条件下，则只