版权所有·禁止翻制、电子传阅、发善 SN/T1768-2006 V一最终定容体积数，单位为毫升(mL): 2—换算常数： m—供试试料样品质量，单位为克(g)。 本方法分别计算孔雀石绿及代谢产物隐色孔雀石绿，并分别报告孔雀石绿及代谢产物隐色孔雀石 绿 本方法分别计算结品紫及代谢产物隐色结品紫，并分别报告结品紫及代谢产物隐色结品紫结果。 3测定低限、回收率 3.1检测限 本方法孔雀石绿，隐色孔雀石绿，结晶紫、隐色结品紫的检测限均为2.0g/kg。 3.2回收率 本方法五雀石绿，隐色孔雀石绿，结晶紫、隐色结晶紫回收幽为：85%一I05%, 4液相色谱-由联质谱法 4.1原理 试样中残留的孔雀石绿，结品紫及其代物用孔雀石绿，结品紫快速检测前处理试剂盒提供的试剂 提取、浓缩后用液相色谱串联质谐进行检测，外标法定量。 4.2试荆和材魁 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。 4.2. 乙腈：色谱纯 4.2.2无水乙酸铵。 4.2.3冰乙酸：色谱纯 4.2.4异丙醇 4.2.55m ol/L乙酸铵缓冲溶液：称取0.385g无水乙酸铵，溶解于大约980mL水中，用冰乙酸调节 pH到4.5，最后用水定容到1000mL,过0.2m滤腿 4.2.6标准品：孔餐石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫隐色结晶紫纯度大于98%。 4.2.7标准贮各溶液，准确称取孔雀石绿、隐色孔常石绿、结品紫、隐色结品紫各10田g,用乙醋分别溶 解定容于100mL容量瓶中，配制成100红g/mL的标准心备液。 4.2.8混合标准溶液：用流动相稀释标准贮备溶液，配制成孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫，隐色结品 紫均为10g/mL的混合标准溶液。 1光保存 4.2.9孔金石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盆， 4.3仪器和设备 4.3.1高效液相色谱-串联质谱联用仪：配有电隨雾(ES)离子源 4.3.2匀浆机 4.3.3 旋转慕发仪 4.3.4离心机：4000r/min、8000r/min 4.3.5撒荡器 4.3.6相声波水裕 4.3.7聚四氟乙烯离心管：2.5mL,50mL,带塞 4.3.8 微孔滤膜：0.45m。 4.4测定步骤 4.4.1提取和净化 准确称取已捣碎的样品5.00g于50mL离心管中，先加入孔雀石绿、结品紫快速检测前处理试剂
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版权所有·禁止翻制、电子传阅、发鲁 SN/T1768-2006 盒中的提取剂1（液体20.0mL),用匀浆机以8000r/min的速度均质30s,再加入提取剂2（周体粉 末)，振荡1min,4000r/mim离心5mim,取上清液10.0mL于鸡心瓶中再加人异丙醇10mL, 50℃~55℃水浴旋转蒸干，残留物用2.5mL流动相溶解，溶解液放入2.5mL,离心管中，8000r/min 离心5min后，用微孔滤膜过滤，滤液供仪器测定 4.4.2绘制标准工作曲线 移取孔雀石绿、隐色孔雀绿、结晶紫、隐色结品紫混合标准溶液，用流动相稀释成0.1g/mL 0.2ng/mL,0.5ng/mL、L.0ng/mL、5.0ng/mL、l0ng/mL标准工作溶液，用高效液相色谱-串联质谱 仪测定，得出标准工作曲线 4.4.3测定 4.4,3.1高效液相色谱-串联质谱条件 a)色谱柱：C柱，150mmX2.1mm(内径)，粒度5m: b)流动相：乙晴+5mmol/L,乙酸按(75+25，V/V): 流速：0.2ml/min 柱温：35℃， c)进样量：10L )离子源：电晴露ES1.正离子」 g)扫描方式：多反应监测MRM: h) 雾化 、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气：使用前应调节各气体谎量以使质谱灵献 度达到要求： D喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度： j)监测离子对：孔雀石绿m/2329/313(定量离子)，329/208：隐色孔雀石绿m/2331/316(定量离 子)、331/239：结品紫m/2372/356(定量离子)、372/251：隐色结品崇m/2374/358(定景离 子)、374/238 4.4,3.2液相色谱串联质谱定量测定 按照4.4.3.1液相色谱串联质谐条件测定样品和标准工作溶液，标准曲线法测定样液中的孔雀石 绿、隐色孔金石绿、结品紫、隐色结晶紫含量。样品中被测物残留量应在标准曲线范围之内，如果含量超 出标准曲线范，应用流动相适当稀释。在上述色谱条件下，孔雀石绿，结品紫、隐色孔雀石绿，隐色结 晶紫的保留时间约为1.89min,5.35min,2.47min和5.51mim,标准溶液的液相色谱电喷雾质量色 谐图参见附录B中的图B1 4.4.3.3液相色谱-串联质谱定性测定 按照4.4.3.1液相色谱-串联质谱条件定样品和标准工作溶液，分别计算样品和标准工作溶液由 一物质 两对子色清连断积的比值，仅当西者数值的相对棉花本于25时方可确定西者为圆 除不加试样外，均按上述测定步强进行。 4.6结果计算表述 按式(2)分别计算供试样品中的孔雀石绿，流色孔室石绿，结品紫和色结晶残留量，计算结果需 扣除空白。 .(2》 式中： 一水产品中孔蛋石绿、隐色孔雀石绿、结品紫或隐色结品紫残留量，单位为微克每千克(g/kg): 一标准曲线上查出试样溶液中孔衡石绿，隐色孔雀石绿，结品紫和隐色结品紫的标准工作溶液 浓度，单位为微克每升(g/L):
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