(d)适当的脱钙速度 、强酸脱钙剂 1.含甲酸脱钙液 Gooding和 Stewart氏液(甲酸一福尔马林液) 配方:甲酸 福尔马林 蒸馏水 加至100ml 5%的甲酸是一种良好的常规脱钙剂,速度适当,组织损害小。当甲酸成分增至25% 则增快脱钙速度,加入甲醛可适当保护组织不受酸损害,但应切记,增加脱钙速度只 能靠牺牲细胞微细构造来获得。 根据组织的厚度和钙化程度,在5%甲酸液内2-4天可完全脱钙,横切的肋骨需 36-48小时。 2.含盐酸脱钙液 Von ebner氏液 配方:浓盐酸 氯化钠 7.5ml 蒸馏水加至100ml 盐酸脱钙易使组织收缩,作用速度较快,用氯化钠作为溶剂则效果良好,牙齿脱 钙时盐酸可增至10-20%。脱钙时,每日应加盐酸(0.5%)直至完成脱钙,横切的人 肋骨(5毫米厚度)于36-72小时内脱钙。 3.硝酸脱钙液 是最常用的脱钙剂,用硝酸作脱钙液的缺点是形成亚硝酸而使溶液呈黄色,产生 颜色即迅速影响脱钙速度,且组织的黄染会妨碍随后的染色反应。在硝酸内加入0.1% 尿素可以防止变黄而使之无色,但尿素仅有暂时作用,一旦硝酸显淡黄时需要加入, 福尔马林一硝酸液( Clayden氏液) 配方:福尔马林 Sml 硝酸(比重141)7.5-15ml 蒸馏水加至 100ml 此处方中甲醛可部分地抑制硝酸的浸软作用,这即具有脱钙作用,又具有固定作 用,硝酸脱钙迅速,组织不膨胀,掌握好脱钙时间可直接脱水,不影响染色效果。但 最好先洗去硝酸 横切人肋骨(5mm)用含7.5%硝酸液于1-2天内脱钙, 硝酸水溶液 配方:硝酸(用0.1尿素稳定) 5-10 蒸馏水 加至 100ml 此液用作常规脱钙剂,作用迅速,对组织不膨胀,对细胞的保存和染色比前者更 好,能适用多种染色技术,但每日需要更换新鲜溶液,最好早晚各一次,一般1-3天 完成 横切人肋骨(5mm)在12-24小时内脱钙 、螯合剂脱钙 乙二胺四乙酸(EDIA)是用以脱钙地螯合剂。为有机化合物,有结合某些金属的 能力,能结合钙盐,15%的溶液即起脱钙作用,组织用此方法脱钙,对组织破坏性小
16 （d） 适当的脱钙速度。 一、强酸脱钙剂 1.含甲酸脱钙液 Gooding和Stewart氏液（甲酸－福尔马林液） 配方：甲酸 5－25ml 福尔马林 5ml 蒸馏水 加至 100ml 5%的甲酸是一种良好的常规脱钙剂，速度适当，组织损害小。当甲酸成分增至25% 则增快脱钙速度，加入甲醛可适当保护组织不受酸损害，但应切记，增加脱钙速度只 能靠牺牲细胞微细构造来获得。 根据组织的厚度和钙化程度，在5％甲酸液内2－4天可完全脱钙，横切的肋骨需 36－48小时。 2.含盐酸脱钙液 Von Ebner氏液 配方：浓盐酸 15ml 氯化钠 7.5ml 蒸馏水 加至 100ml 盐酸脱钙易使组织收缩，作用速度较快，用氯化钠作为溶剂则效果良好，牙齿脱 钙时盐酸可增至10－20%。脱钙时，每日应加盐酸（0.5%）直至完成脱钙，横切的人 肋骨（5毫米厚度）于36－72小时内脱钙。 3． 硝酸脱钙液 是最常用的脱钙剂，用硝酸作脱钙液的缺点是形成亚硝酸而使溶液呈黄色，产生 颜色即迅速影响脱钙速度，且组织的黄染会妨碍随后的染色反应。在硝酸内加入0.1％ 尿素可以防止变黄而使之无色，但尿素仅有暂时作用，一旦硝酸显淡黄时需要加入。 福尔马林－硝酸液（Clayden氏液） 配方：福尔马林 5ml 硝酸（比重1.41） 7.5－15ml 蒸馏水 加至 100ml 此处方中甲醛可部分地抑制硝酸的浸软作用，这即具有脱钙作用，又具有固定作 用，硝酸脱钙迅速，组织不膨胀，掌握好脱钙时间可直接脱水，不影响染色效果。但 最好先洗去硝酸。 横切人肋骨（5mm）用含7.5％硝酸液于1－2天内脱钙。 硝酸水溶液 配方：硝酸（用0.1尿素稳定） 5－10ml 蒸馏水 加至 100ml 此液用作常规脱钙剂，作用迅速，对组织不膨胀，对细胞的保存和染色比前者更 好，能适用多种染色技术，但每日需要更换新鲜溶液，最好早晚各一次，一般1－3天 完成。 横切人肋骨（5mm）在12－24小时内脱钙。 二、螯合剂脱钙 乙二胺四乙酸（EDTA）是用以脱钙地螯合剂。为有机化合物，有结合某些金属的 能力，能结合钙盐，15%的溶液即起脱钙作用，组织用此方法脱钙，对组织破坏性小
即放置数月亦不致引起对组织的破坏,对以后大多数的染色技术皆可得到满意结果 经10%中性福尔马林盐固定后,将组织移到50倍用磷酸盐缓冲剂缓冲至PH值等于 7的55%EDTA内。 不超过5毫米厚度的小块组织在此液内每4-5天换液一次,更换三次后再每天换 次以便较准确的确定脱钙终点。脱钙“终点”可用X射线方法或用草酸盐化学方法 完全脱钙后将组织直接移到70%酒精内常规脱水,浸蜡,石蜡或火棉胶包埋。 、脱钙步骤 1.取材:骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片。 2.固定:再以10%福尔马林固定2天。 将组织置于脱钙剂中,每日更换新鲜液、直至组织软化为止。 4.流水冲洗24小时(除酸)。 5.进行常规脱水,透明,浸蜡,切片。 四、鉴定脱钙是否彻底 确定脱钙“终点”三种方法 1.最常用的是最简单的方法一一针刺,如果很容易被刺透,而且不感到阻力时,说 明组织基本上脱钙完全,否则应继续脱钙。靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住,而 且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤 2.用Ⅹ射线检查:看组织内是否仍有钙质。 3.用化学实验检查 取5ml脱钙液用2M的NaOH(氢氧化钠)调整至中性,再加5%草酸钠或草酸 铵lml,液体混浊表示有钙质。迟至5分钟仍不混浊表示脱钙液中不含有钙质 组织中仍有钙质时,一定量的钙离子会溶于脱钙液中,游离的钙会干扰脱钙作用 的完成。显然,应在每次试验时完全更换,再试验中必须经过2一3小时间隔让钙溶 解, 五.酸的中和 脱钙后水洗24小时,目的是除去组织中经无机酸浸渍后过多的酸,以免影响染 色。再冲洗前应将组织用一种碱处理以使之脱酸呈中性,可用5%硫酸钾或硫酸钠处 理过夜。(否则会引起组织膨胀)但直接转移到稀酒精(70%)内过12-18小时换液 2次,再继续脱水,经无水酒精,氯仿透明,石蜡包埋,切片,整个过程其酸已全部 除去,在多数情况下不仅不膨胀且对染色反应能有所改善。因此不冲洗对染色也没大 碍,只是脱水剂被酸化。 第六节组织的冲洗 组织经过固定后,脱水之前应进行冲洗,将组织内的固定液洗干净,否则残留组 织内的固定液有碍制片和染色,而有些固定液则可在组织中继续起到脆化组织的作 用,以至于损坏组织,给制片工作带来不利。在冲洗时,冲洗剂的选择应依固定液的 种类和性质而有所不同。 冲洗时应注意以下事项: 1.水溶性的固定剂:需用流水冲洗
17 即放置数月亦不致引起对组织的破坏，对以后大多数的染色技术皆可得到满意结果。 经10%中性福尔马林盐固定后，将组织移到50倍用磷酸盐缓冲剂缓冲至PH值等于 7的5.5％EDTA内。 不超过5毫米厚度的小块组织在此液内每4－5天换液一次，更换三次后再每天换 液一次以便较准确的确定脱钙终点。脱钙“终点”可用X射线方法或用草酸盐化学方法。 完全脱钙后将组织直接移到70%酒精内常规脱水，浸蜡，石蜡或火棉胶包埋。 三、脱钙步骤 1．取材：骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片。 2．固定：再以10%福尔马林固定2天。 3．将组织置于脱钙剂中，每日更换新鲜液、直至组织软化为止。 4．流水冲洗24小时（除酸）。 5．进行常规脱水，透明，浸蜡，切片。 四、鉴定脱钙是否彻底 确定脱钙“终点”三种方法： 1. 最常用的是最简单的方法――针刺，如果很容易被刺透，而且不感到阻力时，说 明组织基本上脱钙完全，否则应继续脱钙。靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住，而 且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤。 2．用 X 射线检查：看组织内是否仍有钙质。 3．用化学实验检查： 取 5ml 脱钙液用 2M 的 NaOH（氢氧化钠）调整至中性，再加 5％草酸钠或草酸 铵 1ml，液体混浊表示有钙质。迟至 5 分钟仍不混浊表示脱钙液中不含有钙质。 组织中仍有钙质时，一定量的钙离子会溶于脱钙液中，游离的钙会干扰脱钙作用 的完成。显然，应在每次试验时完全更换，再试验中必须经过 2－3 小时间隔让钙溶 解。 五．酸的中和 脱钙后水洗 24 小时，目的是除去组织中经无机酸浸渍后过多的酸，以免影响染 色。再冲洗前应将组织用一种碱处理以使之脱酸呈中性，可用 5％硫酸钾或硫酸钠处 理过夜。（否则会引起组织膨胀）但直接转移到稀酒精（70％）内过 12－18 小时换液 2 次，再继续脱水，经无水酒精，氯仿透明，石蜡包埋，切片，整个过程其酸已全部 除去，在多数情况下不仅不膨胀且对染色反应能有所改善。因此不冲洗对染色也没大 碍，只是脱水剂被酸化。 第六节 组织的冲洗 组织经过固定后，脱水之前应进行冲洗，将组织内的固定液洗干净，否则残留组 织内的固定液有碍制片和染色，而有些固定液则可在组织中继续起到脆化组织的作 用，以至于损坏组织，给制片工作带来不利。在冲洗时，冲洗剂的选择应依固定液的 种类和性质而有所不同。 冲洗时应注意以下事项： 1. 水溶性的固定剂：需用流水冲洗
2.酒精溶剂的固定剂:应用同浓度的酒精浸洗 3.含苦味酸的固定剂:(苦味酸与甲醛混合液除外),须用70%酒精浸洗,以免 水洗后固定作用消失 4.含有升汞固定剂:组织经固定后应在冲洗剂一水或酒精中加碘以洗去组织内 汞的沉淀 5.含有铬酸的固定剂:组织在冲洗时最好置于暗处,以免产生沉淀或使组织硬 化而影响制片。 第二章石蜡包埋技术 制作石蜡切片,切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中,而水与石蜡又是不相混 合的,所以在浸蜡,包埋前必须将组织内所含的水分脱去。而大多数的组织固定剂是 水溶液,随后的水冲洗也使其含有大量水分,因此必须先行脱水,一般是浸入逐级增 加浓度的酒精来完成。由于酒精和石蜡不能混合,须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精, 因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状,所以此步骤又称 透明。最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块ε 常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤,即固定,脱水,透明,浸蜡和包埋,前 章中已述过固定 第一节脱水 脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分,为下一步透明及浸蜡创造条件。此外, 脱水还可以使组织再次发生一定的硬化,脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的 液体 常用的脱水剂 1.酒精:是制片最常用的试剂,可与水在任何比例下相混合,酒精的脱水能力 比较强,又能硬化组织。但是酒精的船头速度很快,对于组织会有明显的收缩作用 因此在以酒精作为脱水剂时,应该先从浓度较低的酒精开始,然后递增其浓度,这样 可以避免组织过度收缩 第一瓶酒精浓度随固定剂,脱水组织的大小和种类而异,经水溶性固定剂固定的 细柔组织需要慢慢脱水,从50%酒精开始。如眼球,组胚组织等大多数组织标本则是 从70%酒精开始,再经80%,95%以至无水酒精。但是有时为了某种特殊要求,例 如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本,为了防止糖元和尿酸结晶在 水中消失却要直接投入无水酒精中固定,而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过 程。经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。 用AAF固定液固定的组织可直接置于95%酒精开始脱水。用醇性固定剂(如 arnoy)则可置于高浓度无水酒精内,但应多次换液以除酸
18 2. 酒精溶剂的固定剂：应用同浓度的酒精浸洗。 3. 含苦味酸的固定剂：（苦味酸与甲醛混合液除外），须用 70％酒精浸洗，以免 水洗后固定作用消失。 4. 含有升汞固定剂：组织经固定后应在冲洗剂－水或酒精中加碘以洗去组织内 汞的沉淀。 5. 含有铬酸的固定剂：组织在冲洗时最好置于暗处，以免产生沉淀或使组织硬 化而影响制片。 第二章 石蜡包埋技术 制作石蜡切片，切片前须将石蜡渗透组织包埋于石蜡中，而水与石蜡又是不相混 合的，所以在浸蜡，包埋前必须将组织内所含的水分脱去。而大多数的组织固定剂是 水溶液，随后的水冲洗也使其含有大量水分，因此必须先行脱水，一般是浸入逐级增 加浓度的酒精来完成。由于酒精和石蜡不能混合，须再用一种石蜡的溶剂来置换酒精， 因大多数石蜡溶剂有使组织的折光率增高并表现为透明或半透明状，所以此步骤又称 透明。最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块。 常规的石蜡包埋过程包括五个基本步骤，即固定，脱水，透明，浸蜡和包埋，前 一章中已述过固定。 第一节 脱 水 脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。此外， 脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的 液体。 一．常用的脱水剂 1．酒精：是制片最常用的试剂，可与水在任何比例下相混合，酒精的脱水能力 比较强，又能硬化组织。但是酒精的船头速度很快，对于组织会有明显的收缩作用。 因此在以酒精作为脱水剂时，应该先从浓度较低的酒精开始，然后递增其浓度，这样 可以避免组织过度收缩。 第一瓶酒精浓度随固定剂，脱水组织的大小和种类而异，经水溶性固定剂固定的 细柔组织需要慢慢脱水，从 50％酒精开始。如眼球，组胚组织等大多数组织标本则是 从 70％酒精开始，再经 80％，95％以至无水酒精。但是有时为了某种特殊要求，例 如要做糖元的切片标本或是要做尿酸结晶染色切片标本，为了防止糖元和尿酸结晶在 水中消失却要直接投入无水酒精中固定，而不需要经过水洗和低浓度酒精的脱水过 程。经无水酒精固定后的组织只需要再经过换一次无水酒精脱水即可。 用 AAF 固定液固定的组织可直接置于 95％酒精开始脱水。用醇性固定剂（如 Carnoy）则可置于高浓度无水酒精内，但应多次换液以除酸
般情况下,组织经过70%,80%,90%,95%,以至无水酒精的脱水程序,即 可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时进行脱水,则要求保持液体的浓 度以保证脱水的作用,最好是以两次95%酒精,两次100%酒精重复进行脱水,以保 证组织的水分脱净。脱水时间应视组织种类,组织块大小,厚薄和固定剂的不同而异 如脱钙的骨组织,实质性脏器等的脱水过程宜短,而疏松结缔组织,脂肪组织等,脱 水过程则宜适当延长。水分必须脱干净,脂肪必须溶去。含有铬酸的固定剂固定的组 织,脱水时间不宜过长,而镀银组织更应注意,脱水时间应比为镀银的同类组织要短。 脱水的基本原则:从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精,以保持组织中的水分 完全脱净。一般 IcmXlcmX0.2cm大小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可达到完全 脱水。在各级浓度酒精内处理的最短时间分别减少到2_4小时也能获得满意的结果。 如果组织脱水不尽,随后的透明,浸蜡都会受到影响,致使切片很难以完成。较差质量的 切片,很容易造成在染色时脱片,这样的组织蜡块,因其含有一定的水分,一经与空气接 触即干燥而凹陷。脱水不尽的组织是不能切出很好的切片的。 外检标本的制作,目前都采用快速脱水的方法。科研标本教学标本的脱水时间比 较长,其目的在于更充分脱水并适当加强了组织的硬度 酒精脱水剂使用不宜太久,应适时更换新液。当酒精混浊,变黄或酒精滴于水中出 现乳白色混浊时,说明酒精中溶解了过量的脂类,这种情况一出现,将会影响脱水,则应 及时更换。 各种浓度酒精的配制: 切片室内应常备有70%809,85%等各种浓度的酒精。配制时应以95%酒精作为基 液加水稀释不要用无水酒精去配制,因无水酒精的价格较高极不经济。 配制方法如下: 先将高浓度酒精注入量杯,其量同将要稀释酒精浓度数字相等。 2.加入蒸馏水,致总量达到原酒精浓度的数字量。例如: (一)用95%酒精配制成70%酒精时: (1)取95%酒精70毫升 2)加蒸馏水使达到95毫升 稀释后的酒精既为70%的酒精 二)用80%酒精配制成60%酒精时: (1)取80%酒精60毫升 (2)加蒸馏水使达到80毫升 稀释后的酒精既为浓度为60%的酒精其余类推,其他的试剂的稀释也均可以参照 此方法进行配制。 2丙酮( Acetone):可用作固定液,也是一种比较好的脱水剂。脱水能力强、速度快, 可配制不同浓度进行脱水。但一般情况下,多用在无水酒精的补充脱水 丙酮脱水时间比酒精强但容易使组织过度硬化,所以应适当掌握脱水时间。 3正丁醇(γ- Buty alcohol):正丁醇脱水能力较酒精弱可与水、酒精相混合,而且也 能溶解石蜡,因此正丁醇不仅可以替代酒精使组织脱水,还可以代替二甲苯使组织透 明。平常在稀释时都与酒精按照一定比例配制使用,或将组织脱水至90%酒精后移入正 丁醇,正丁醇再脱水后可直接投入石蜡。用正丁醇脱水,组织比较少引起收缩和硬化等 不良结果
19 一般情况下，组织经过 70％，80％，90％，95％，以至无水酒精的脱水程序，即 可达到脱水的要求。但是为了能使大量的组织块同时进行脱水，则要求保持液体的浓 度以保证脱水的作用，最好是以两次 95％酒精，两次 100％酒精重复进行脱水，以保 证组织的水分脱净。脱水时间应视组织种类，组织块大小，厚薄和固定剂的不同而异。 如脱钙的骨组织，实质性脏器等的脱水过程宜短，而疏松结缔组织，脂肪组织等，脱 水过程则宜适当延长。水分必须脱干净，脂肪必须溶去。含有铬酸的固定剂固定的组 织，脱水时间不宜过长，而镀银组织更应注意，脱水时间应比为镀银的同类组织要短。 脱水的基本原则：从低浓度酒精开始逐渐升到高浓度酒精，以保持组织中的水分 完全脱净。一般 1cmX1cmX0.2cm 大小的组织,脱水全过程仅需要数小时即可达到完全 脱水。在各级浓度酒精内处理的最短时间分别减少到 2—4 小时也能获得满意的结果。 如果组织脱水不尽,随后的透明,浸蜡都会受到影响,致使切片很难以完成。较差质量的 切片,很容易造成在染色时脱片,这样的组织蜡块，因其含有一定的水分,一经与空气接 触即干燥而凹陷。脱水不尽的组织是不能切出很好的切片的。 外检标本的制作,目前都采用快速脱水的方法。科研标本,教学标本的脱水时间比 较长,其目的在于更充分脱水,并适当加强了组织的硬度。 酒精脱水剂使用不宜太久,应适时更换新液。当酒精混浊,变黄或酒精滴于水中出 现乳白色混浊时,说明酒精中溶解了过量的脂类,这种情况一出现,将会影响脱水,则应 及时更换。 各种浓度酒精的配制： 切片室内应常备有 70%,80%,85%等各种浓度的酒精。配制时应以 95%酒精作为基 液加水稀释,不要用无水酒精去配制,因无水酒精的价格较高,极不经济。 配制方法如下： 1．先将高浓度酒精注入量杯，其量同将要稀释酒精浓度数字相等。 2．加入蒸馏水，致总量达到原酒精浓度的数字量。例如： (一)用 95%酒精配制成 70%酒精时： (1)取 95%酒精 70 毫升； (2)加蒸馏水使达到 95 毫升； 稀释后的酒精既为 70%的酒精。 (二) 用 80%酒精配制成 60%酒精时： (1)取 80%酒精 60 毫升； (2)加蒸馏水使达到 80 毫升； 稀释后的酒精既为浓度为 60%的酒精.其余类推,其他的试剂的稀释也均可以参照 此方法进行配制。 2.丙酮(Acetone)：可用作固定液,也是一种比较好的脱水剂。脱水能力强、速度快, 可配制不同浓度进行脱水。但一般情况下,多用在无水酒精的补充脱水。 丙酮脱水时间比酒精强,但容易使组织过度硬化,所以应适当掌握脱水时间。 3.正丁醇(γ-Buty alcohol)：正丁醇脱水能力较酒精弱,可与水、酒精相混合,而且也 能溶解石蜡,因此正丁醇不仅可以替代酒精使组织脱水,还可以代替二甲苯使组织透 明。平常在稀释时都与酒精按照一定比例配制使用,或将组织脱水至 90%酒精后移入正 丁醇, 正丁醇再脱水后可直接投入石蜡。用正丁醇脱水,组织比较少引起收缩和硬化等 不良结果
4二氧乙环( Dioxan):二氧乙环是一种有毒物质,易挥发(使用场所必须通风),能同 水、酒精、二甲苯相混合并能溶解石蜡,是一种既可以脱水,也具有透明效果的液体 脱水一般可以70%开始,再经过90%至纯二氧乙环然后浸入石蜡。二氧乙环脱水对组 织无收缩和硬化等不良现象对较硬的组织或易收缩的组织可使用二氧乙环。 二组织的摇震 为加快脱水进程可将标本放入各级酒精内借助机器或手工震摇,还可以加温促进 脱水。即将标本装在塞紧的玻璃瓶置于包埋箱或温箱内,因液体受热产生的正压可增 加溶液的对流。但热酒精会使组织过硬,并有爆裂危险,除急诊外,最好不用此方法 第二节透明 组织脱水后,还要经过一个浸蜡的媒剂透明过程。目的是使石蜡渗透到组织中去, 达到包埋的支持作用。常用的脱水剂如酒精等,不能溶解石蜡与之相混合,因此必须 使用一种既可以同酒精又能同石蜡相混合的媒剂,当组织脱水后,浸蜡之前将组织投 入这种媒剂中。由于两剂能相混合,另一方面也由于这种媒剂比酒精比重大,组织中 的酒精就被该媒剂取代,待酒精完全被该媒剂完全取代后,组织即成透明状态,因此 我们长称这种媒剂为透明剂,在制片中的这一过程就称为透明过程。实质上透明仅是 种过程而非目的,其所以出现透明现象使因其折光系数改变的缘故。从组织的状态 上看,由于组织经过媒剂的作用之后,其折射系数近于组织蛋白的折射系数,从而显 示出透明状态。组织一旦呈现透明状态,也说明脱水剂已被媒剂所取代。透明后就可 以将组织浸入溶解的石蜡进行浸蜡 透明剂 透明剂很多,一般常用的有二甲苯,苯,甲苯,氯仿,香柏油等。 1.二甲苯:是最为常用的一种透明剂,它能与酒精,丙酮相混合,又是石蜡的 溶剂。在透明过程中,组织继续发生硬化,由于二甲苯对组织的收缩性强,作用迅速 因此,组织在二甲苯中时间不宜过长,否则组织容易变脆变硬,一般是达到组织的透 明为度,小块组织在半至一小时内透明。为了不使组织过度硬化,苯则。是更好的 种透明剂,它较甲苯和二甲苯的作用稍缓,对组织收缩较少,不易变脆。但苯较二甲 苯毒性大,挥发快,故应注意安全使用 2.氯仿:也是一种很好的媒剂,它的作用缓和。组织在此液内过夜也不至于过 硬变脆,这一点较苯,二甲苯和甲苯优良。但氯仿比重较大,折光率较小,不能改变 组织的折光率,组织在氯仿中不易呈现二甲苯那样的透明现象,所以组织要比实际需 要浸渍更长一些时间保证完全滲透和置换出酒精。 3.香柏油:是研究处理细柔组织的最佳透明剂,因它的硬化作用极小,组织在 此液体内较长时间甚至几个月也可无妨。过硬的组织脱水后,(如皮肤和致密纤维组 织)用香柏油透明,经此处理后的组织容易切片。不过香柏油的浓度大,渗透力弱 同石蜡混合不及其他透明剂效果好,故常规石蜡切片一般不用 透明时间的长短因组织的大小而异。例如脑组织和有血块的组织,就应该缩短在 甲苯内留置时间,而一些肌肉组织和胃肠组织则应该稍延长在二甲苯内留置时间, 最好先投入酒精和透明剂等量混合液半小时,再入透明剂,并更换一次透明剂,待组
20 4.二氧乙环(Dioxan)：二氧乙环是一种有毒物质,易挥发(使用场所必须通风),能同 水、酒精、二甲苯相混合并能溶解石蜡,是一种既可以脱水,也具有透明效果的液体。 脱水一般可以 70%开始,再经过 90%至纯二氧乙环,然后浸入石蜡。二氧乙环脱水对组 织无收缩和硬化等不良现象,对较硬的组织或易收缩的组织可使用二氧乙环。 二.组织的摇震 为加快脱水进程可将标本放入各级酒精内借助机器或手工震摇，还可以加温促进 脱水。即将标本装在塞紧的玻璃瓶置于包埋箱或温箱内，因液体受热产生的正压可增 加溶液的对流。但热酒精会使组织过硬，并有爆裂危险，除急诊外，最好不用此方法。 第二节 透 明 组织脱水后，还要经过一个浸蜡的媒剂透明过程。目的是使石蜡渗透到组织中去， 达到包埋的支持作用。常用的脱水剂如酒精等，不能溶解石蜡与之相混合，因此必须 使用一种既可以同酒精又能同石蜡相混合的媒剂，当组织脱水后，浸蜡之前将组织投 入这种媒剂中。由于两剂能相混合，另一方面也由于这种媒剂比酒精比重大，组织中 的酒精就被该媒剂取代，待酒精完全被该媒剂完全取代后，组织即成透明状态，因此 我们长称这种媒剂为透明剂，在制片中的这一过程就称为透明过程。实质上透明仅是 一种过程而非目的，其所以出现透明现象使因其折光系数改变的缘故。从组织的状态 上看，由于组织经过媒剂的作用之后，其折射系数近于组织蛋白的折射系数，从而显 示出透明状态。组织一旦呈现透明状态，也说明脱水剂已被媒剂所取代。透明后就可 以将组织浸入溶解的石蜡进行浸蜡。 透明剂 透明剂很多，一般常用的有二甲苯，苯，甲苯，氯仿，香柏油等。 1．二甲苯：是最为常用的一种透明剂，它能与酒精，丙酮相混合，又是石蜡的 溶剂。在透明过程中，组织继续发生硬化，由于二甲苯对组织的收缩性强，作用迅速， 因此，组织在二甲苯中时间不宜过长，否则组织容易变脆变硬，一般是达到组织的透 明为度，小块组织在半至一小时内透明。为了不使组织过度硬化，苯则。是更好的一 种透明剂，它较甲苯和二甲苯的作用稍缓，对组织收缩较少，不易变脆。但苯较二甲 苯毒性大，挥发快，故应注意安全使用。 2．氯仿：也是一种很好的媒剂，它的作用缓和。组织在此液内过夜也不至于过 硬变脆，这一点较苯，二甲苯和甲苯优良。但氯仿比重较大，折光率较小，不能改变 组织的折光率，组织在氯仿中不易呈现二甲苯那样的透明现象，所以组织要比实际需 要浸渍更长一些时间保证完全渗透和置换出酒精。 3．香柏油：是研究处理细柔组织的最佳透明剂，因它的硬化作用极小，组织在 此液体内较长时间甚至几个月也可无妨。过硬的组织脱水后，（如皮肤和致密纤维组 织）用香柏油透明，经此处理后的组织容易切片。不过香柏油的浓度大，渗透力弱， 同石蜡混合不及其他透明剂效果好，故常规石蜡切片一般不用。 透明时间的长短因组织的大小而异。例如脑组织和有血块的组织，就应该缩短在 二甲苯内留置时间，而一些肌肉组织和胃肠组织则应该稍延长在二甲苯内留置时间， 最好先投入酒精和透明剂等量混合液半小时，再入透明剂，并更换一次透明剂，待组