分析对象: 测量含量很低的生物活性化合物: 如蛋白质(酶,接受体,抗体 激素(甾族化合物,甲状腺激素,酞激素) 药物及微生物等。 优点:专一性强,灵敏度高 缺点: ①放射性同位素可能损害人们的身体健康,以致 于实验室要有特殊防护技术 ②该法还需要用贵重的闪烁计数器和试剂 ③稳定性同位素的寿命相对较短
分析对象： 测量含量很低的生物活性化合物： 如蛋白质（酶，接受体，抗体） 激素（甾族化合物，甲状腺激素，酞激素） 药物及微生物等。 优点：专一性强，灵敏度高 缺点： ①放射性同位素可能损害人们的身体健康，以致 于实验室要有特殊防护技术 ②该法还需要用贵重的闪烁计数器和试剂 ③稳定性-同位素的寿命相对较短
3酶免疫分析法 用酶标记抗原或抗体 例:酶联免疫法测定氯霉素 微量反应板—一羊抗兔G抗体 兔抗氯霉素抗体+氯霉素酶结合物 +氯霉素样品 没有结合的酶结合物被洗去,再向相应孔中加入 过氧化氢和邻苯二胺,作用一定时间后,结合后的酶 结合物将无色的邻苯二胺转化为蓝色的产物,加入终 止液后颜色由蓝变黄,用波长450nm(双波长时最适 参考波长≥600nm)酶标仪进行检测,吸光值与样品 中氯霉素含量成反比。 酶不稳定、光度分析线性范围窄
3 酶免疫分析法 用酶标记抗原或抗体 例：酶联免疫法测定氯霉素 微量反应板——羊抗兔IgG抗体 兔抗氯霉素抗体+氯霉素酶结合物 +氯霉素样品 没有结合的酶结合物被洗去，再向相应孔中加入 过氧化氢和邻苯二胺，作用一定时间后，结合后的酶 结合物将无色的邻苯二胺转化为蓝色的产物，加入终 止液后颜色由蓝变黄，用波长450nm（双波长时最适 参考波长≥600nm）酶标仪进行检测，吸光值与样品 中氯霉素含量成反比。 酶不稳定、光度分析线性范围窄
包被羊抗兔IgG抗体 兔抗氯霉素抗体 冷氯霉素 洗涤 洗涤 偶联氯霉素酵蛰走含图联如麽菇在 抗素抗体形成3等型联免接吸 5酶底物相抗体载体 吸光度 竞争型酶联免疫法测定氯霉素含量示意图
竞争型酶联免疫法测定氯霉素含量示意图
4发光免疫分析法 荧光免疫分析法 化学发光免疫分析法 以荧光物质或化学发光反应物质作为标记物。 优点 专一性强 灵敏度高 稳定性好,可避免放射性污染 标记物不同,因而检测方法也不同
4.发光免疫分析法 荧光免疫分析法 化学发光免疫分析法 以荧光物质或化学发光反应物质作为标记物。 优点： 专一性强 灵敏度高 稳定性好，可避免放射性污染 标记物不同，因而检测方法也不同
荧光免疫分析法 Fluonescense Immuuoassay 1.荧光探针 (1)一般要求 a检测最常遇到的样品为血清,它有很高的荧光 背景。 血清蛋白Am325350nm(Ax280mm) 血清中NADH和胆红素430470nm (Aex330-360nm) 探针em>500nm
二．荧光免疫分析法 Fluonescense Immuuoassay 1．荧光探针 （1） 一般要求 a 检测最常遇到的样品为血清，它有很高的荧光 背景。 血清蛋白 λem 325-350 nm (λex 280 nm) 血清中NADH和胆红素 430-470 nm (λex 330-360 nm) 探针λem > 500 nm