加入除去了DNA和 mRNA的细胞提取物 肽链 各管加人多聚 尿嘧啶核苷酸 Tr:酪氨酸 Scr:丝氨酸 Phie:苯丙氨酸Cys:半胱氨酸
加入除去了DNA 和 mRNA的细胞提取物 肽链
以多聚物为模板指导多肽的合成 1961 Nirenberg Matthaei poly U--UUU--编码Phe poly C------Pro poly A--------Lys
以多聚物为模板指导多肽的合成 1961 Nirenberg 和 Matthaei poly U-----UUU-------编码 Phe poly C ------Pro poly A --------Lys
于是作如下实验 人工合成多种三核苷酸(UUU、UCU、UGU等) 为模板 与含核糖体、20种aa-tRNA和适当离子强度的 反应液保温 使反应液通过硝酸纤维素滤膜,其中只有核糖 体或结合aa一tRNA的核糖体能留在滤膜上
于是作如下实验 人工合成多种三核苷酸(UUU、UCU、UGU等) 为模板 与含核糖体、20种 aa-tRNA和适当离子强度的 反应液保温 使反应液通过硝酸纤维素滤膜,其中只有核糖 体或结合aa—tRNA的核糖体能留在滤膜上
实验为20组: Sere14、Leu、LyS、Arg..…(20种) Ser、Leu14、Lys、Arg.… Ser、Leu、Lysl4、Arg… 分析留在滤膜上的核糖体中的aa-tRNA和其相应的模 板 此方法未能破译全部的codon(结合效率)
实验为20组: SerC14 、Leu、Lys、Arg………….(20种) Ser 、LeuC14 、Lys、Arg…………. Ser 、Leu、LysC14 、Arg…………. …………………… 分析留在滤膜上的核糖体中的aa-tRNA和其相应的模 板 此方法未能破译全部的codon (结合效率)
核糖体结合技术 特定三核苷酸为模板+核糖体+20种AA-tRNA (其中一种AA-RNA的氨基酸被14C标记) 保温 硝酸纤维滤膜过滤 分析留在滤膜上的核糖体-AA-tRNA 确定与核糖体结合的AA和模板
核糖体结合技术 保温 硝酸纤维滤膜过滤 分析留在滤膜上的核糖体-AA-tRNA 确定与核糖体结合的AA和模板 特定三核苷酸为模板 + 核糖体 + 20 种AA-tRNA (其中一种AA-tRNA的氨基酸被14C标记)