园艺植物组织培养实验指导 实验一MS培养基母液的配制 一、实验目的 了解MS培养基母液的组分，掌握培养基母液配制的基本原则。 二、实验内容 根据MS培养基配方，配制MS培养基母液，大量元素母液配成20X,CCl22H0母液100X, 微量元素母液100X,铁盐母液100X,有机成分母液100X(详见附表1)，并将配好的母液依次贴好标 签，保存于4℃冰箱。 三、实验原理 由于培养基成分较多，并且有些成分用量甚微，如果每配制一次即进行多次称，不仅会造成较 大的误差，而且会增加工作量，因而在配制培养基时，为了提高各种药品称量的准确性和取用方便， 通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如20或100倍），配 制培养基时根据用量量取。 四、试剂及器具 试剂：药品按MS培养基配方准备：激素按需要准备；蒸馏水；1mol/L盐酸：1mol/L NaOH。 器具：1/100、1/10000电子天平；冰箱：烧杯：量筒：容量瓶：磁力搅拌器：试剂瓶：标签 纸等。 五、方法和步骤 (一)大量元素母液（母液I) 因大量元素用量大，为避免过高浓度的混合液会发生沉淀，一般配成20倍的母液。配制时先加 入4/5体积的灭过菌的蒸馏水，按表1中化合物出现顺序，依次在1/100的电子天平上称量KNO,. NH4NO3、MgSO47HO、KHPO4后溶解。必须在各药品充分溶解后加入另一种，最后加蒸馏水定 容至1L,即为20X的大量元素母液，贴上标签注明母液名称、倍数（或浓度）、日期，置于普通冰箱 (4℃)贮存。配一升MS培养基，取大量元素母液50ml。CaC122H20经常将单独配制保存。 (二)微量元素（母液II) 微量元素因用量小，为称量方便及精确，常配成100倍的母液，用1/10000电子天平依次称量 MnSO44H20、ZnSO47H20、H3BO3、KI以及Na2MoO42H20,其余同母液I的方法。而CuSO45HO 和CoCl26H20单独配成2000X的保存，配母液时抽取20ml。配1升MS培养基，取微量元素母液 10mle (三)铁盐（母液III) 铁盐为FeS047H,0,由于在使用过程中容易产生F©(OD3沉淀，一般先将其配成螯合物。常配 成100倍母液。称取FeS04·7Hz0,Na2-EDTA,分别加热溶解，待其充分溶解后混合、其余同母液I
园艺植物组织培养实验指导 的方法。配成的铁盐母液呈黄色。每配制1升MS培养基，取铁盐母液用10ml。 (四)有机成分（母液IV) 主要指氨基酸及维生素类物质，将各种有机物质配成混合的100倍母液。分别溶解后混合，定 容。配一升MS培养基，取母液10ml。 (五)植物激素 各种激素母液所需浓度一般为0.2~lg/ml,单独保，配制培养基时根据不同的配方要求分别 加入。 1)IAA、BA、GA3先溶与少量95%酒精，再加水定容到一定浓度。 2)NAA可溶于热水或少量95%的酒精中，再加水定溶到一定浓度。 3)2,4一D不溶于水，可用1mol的NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。 4)KN和BA先溶于少量1mol的HCI中，再加水定容。 5)玉米素先溶于少量95%酒精中，再加水至一定浓度。 六、作业 1、为什么要配置母液？在母液的配制、贮存及使用中应注意哪些问题？ 2
园艺植物组织培养实验指导 附表1MS培养基母液的配方 培养基配方用量 每升母液用量 母液扩大倍用量(ml)升培养基 成分 (mg） (mg) 数 大量元素母液（母液） KNO3 1900 38000 NHaNO3 1650 3300 20 50 MgSO47H2O 370 7400 KH2PO4 170 3400 CaClz2H20 440 44000 100 10 微量元素（母液） MnSO44H2O 22.3 2230 ZnSO47H2O 8.6 860 H3BO3 6.2 920 KI 0.83 83 100 10 Na2MoO42H2O 0.25 25 CuSO45H2O 0.025 2.5 CoCl26H2O 0.025 2.5 铁盐（母液Ⅲ） FeSO7H2O 27.85 2785 100 10 NazEDTA-2H2O 37.25 3725 有机成分（母液V) 甘氨酸 2 200 盐酸硫氨素 0.4 40 盐酸吡哆素 0.5 50 100 10 烟酸 0.5 50 肌醇 100 10000 注：CaC122H20单独配制保存。 CuSO45H20和CoC126H20单独配成2000X的保存，配母液时稀释。 3
园艺植物组织培养实验指导 实验二 MS固体培养基的配制与灭菌 一、实验目的 学习用母液法配制MS固体培养基，掌握培养基灭菌的方法及操作过程。 二、实验内容 根据已配好MS培养基母液，配制1升MS固体培养基，首先在准备好的烧杯中加入800mL 蒸馏水，依次抽取20X大量元素母液50mL;100 X CaCl22H0母液5mL;100X微量元素母液5mL: 100X铁盐母液5mL:100X有机成分母液5mL。用1mol/L NaOH调pH值在5.8-6.2之间，加入5g 琼脂，微波加热致沸腾，并保持3-5min后分装在20个三角瓶中，高压灭菌20nmin后待其自然冷却后 准备接种。 三、实验原理 培养基是将植物细胞或组织生长所需要的各种营养物质，用人工方法配制成的一种营养基质。 除含有水份、碳水化合物、无机盐外，还有各种必要的维生素、有机附加物及生长调节物质，并根 据植物细胞或组织生长的需要，将培养基的pH值调节在一定范围内。按照是否在培养基中加入琼脂 等凝固剂，培养基又分为固体培养基和液体培养基。由于不同的植物细胞或组织营养要求不同，人 们设计了各种培养基。常用的基本培养基有MS培养基(Murashige and Skoog,l962),B5培养基 (Gamborgetal,1968),N6培养基(Chuetal,1974)等。 培养基含有的各种营养物质，对细菌和霉菌等微生物来说也是很好的营养物质。微生物在培养 基中往往比植物细胞生长更为迅速，并且产生毒素，可致植物细胞死亡。因此，为防微生物污染， 培养基配制好后需及时进行灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。 四、仪器和药品 药品：蔗糖、琼脂、1mol/LHCl、1mol/LNaOH,MS培养基的母液，植物生长调节物质母液。 仪器：电子天平、磁力搅拌器、烧杯(50ml,100ml,500ml,1000ml)、量筒(1000ml,500ml, 25ml)、药勺、称量纸、玻璃棒、移液管或移液枪、微波炉、吸耳球、酸度计、三角瓶(50ml,100ml)、 耐高温高压的封口膜、高压灭菌锅。 五、方法和步骤 (一)MS固体培养基的配制 1、将所需的各贮存母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿，量筒、烧杯、移液管、玻璃棒等 放在指定的位置；准备好蒸馏水及封口塑料薄膜等。 根据MS培养基配方，各种母液的浓度及要求配制的总量，计算好需各种母液的量。取1000l 烧杯一只，加入800ml水，用量筒和移液枪依次抽取20X大量元素母液50mL:100XCaC122H0母 液5mL;100X微量元素母液5mL;100X铁盐母液5mL;100X有机成分母液5mL,磁力搅拌器混 匀