4.抗原分离纯化的一般原则 免疫组化方法检测的抗原中,蛋白 质占了大多数,故此处叙述的一般原则 以蛋白抗原为主要对象
4.抗原分离纯化的一般原则 免疫组化方法检测的抗原中，蛋白 质占了大多数，故此处叙述的一般原则 以蛋白抗原为主要对象
(1)首先选择和建立抗原的检测方法目 的是跟踪监测一系列提纯过程中抗原是 否存在,其含量和活性如何。方法有特 异和非特异之分,前者利用抗原的特异 反应,后者利用抗原已知的理化特性
⑴首先选择和建立抗原的检测方法 目 的是跟踪监测一系列提纯过程中抗原是 否存在，其含量和活性如何。方法有特 异和非特异之分，前者利用抗原的特异 反应，后者利用抗原已知的理化特性
(2)选择抗原含量高的组织为材料 组织中欲提抗原含量越高,提纯也 越容易,且得率越高
⑵选择抗原含量高的组织为材料 组织中欲提抗原含量越高，提纯也 越容易，且得率越高
(3操作中应保持抗原分子的稳定性 如低温、严格pH、防止巯基氧化 在缓冲液中加入浓度1-3×10-4M的 EDTA(乙二胺四乙酸)以螯合除去重金 属离子、防止蛋白酶的水解作用,等等
⑶操作中应保持抗原分子的稳定性 如低温、严格pH、防止巯基氧化、 在缓冲液中加入浓度1―3×1 0ˉ4 M的 EDTA（乙二胺四乙酸）以螯合除去重金 属离子、防止蛋白酶的水解作用，等等
5.抗原分离纯化的一般步骤 (1)增溶溶解常用的方法有①渗透溶 胞;②研磨;③绞切;④超声波;⑤挤压,等。 (2)分离纯化原则是《先粗后细,先 简后繁,先盐析后层析》。 (3抗原纯度的鉴定方法有:琼脂双 扩散、免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)、等电点聚焦电泳等
5.抗原分离纯化的一般步骤 ⑴增溶溶解 常用的方法有①渗透溶 胞;②研磨;③绞切;④超声波;⑤挤压,等。 ⑵分离纯化 原则是《先粗后细，先 简后繁，先盐析后层析》。 ⑶抗原纯度的鉴定 方法有：琼脂双 扩散、免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳 （PAGE）、等电点聚焦电泳等