5.3浸矿微生物的培 5.3.1浸矿微生物的培养基 5.3.2漫矿微生物的采集、分离 5.3.3浸矿微生物的纯化 5.3.4菌种的保藏
5.3 浸矿微生物的培养基、采集、分离纯 化、保藏 ◼ 5.3.1 浸矿微生物的培养基 ◼ 5.3.2 浸矿微生物的采集、分离 ◼ 5.3.3 浸矿微生物的纯化 ◼ 5.3.4 菌种的保藏
5.3.1浸矿微生物的培养基 名称 培养对象 培养基指用人 Leather 铁氧化沟端螺菌 工方法配制的专 氧化铁铁杆菌 供微生物生长繁 氧化亚铁硫杆菌 殖的营养混合物。9 氧化铁铁杆菌 用于培养浸矿细 氧化亚铁硫杆菌 菌的培养基主要 Waksman氧化硫硫杆菌 有表22所示的几ONM 氧化硫硫杄菌 种培养基 Colmer|氧化亚铁硫杆菌
5.3.1 浸矿微生物的培养基 ◼ 培养基指用人 工方法配制的专 供微生物生长繁 殖的营养混合物。 用于培养浸矿细 菌的培养基主要 有表2-2所示的几 种培养基。 名称 培养对象 Leathen 铁氧化沟端螺菌 氧化铁铁杆菌 氧化亚铁硫杆菌 9K 氧化铁铁杆菌 氧化亚铁硫杆菌 Waksman 氧化硫硫杆菌 ONM 氧化硫硫杆菌 Colmer 氧化亚铁硫杆菌
1)液体培养基( Liquid medium) 在液体培养基中营养物质以溶质状态溶解于其 使微生 物能更充分地接触和利用养料,因而也能更好地积累代谢产物。 实验室中,液体培养基主要用于生理、代谢研究及获 得大量菌体;在生产 用于大规模生产、发酵。 9K、 Heathen培养基由于有易被氧化的FeSO47H2O 日温度超过50℃,其中的Fe2+就 地快速氧化,并生成硫 酸高铁、水合硫酸铁及黄钾铁钒沉淀。解决的办法有 1)调节培养基的pH值至1.5。在配制上述两种培养基时 pH值是一个很重要的考虑因素。pH值高则培养基经高温灭菌 后,会在瓶底生成沉淀,而使溶液浑浊;实验表明,在pH值低 的溶液中,培养基的各成分溶解度大些。 2)减少铁盐及磷酸盐的用量并补充少量的酵母膏。调整后 的低磷酸盐培养基组成如下(g K2HPO40.4、 MgSoa7H2O0.4 SO40.4、FeSO47H2027.8、 酵母青02(也可用谷胱苷肤01或半胱氨酸0.1):pH=1.5。 (3)将FeSO47H2O溶液单独过滤灭菌,再与用高温灭菌的 培养基中的其他无机盐溶液混合。这种方法得到的培养基Fe2+ 被氧化成Fe3+的 培养基为浅绿色澄清溶液
◼ 1)液体培养基（Liquid medium） 在液体培养基中营养物质以溶质状态溶解于其中，使微生 物能更充分地接触和利用养料，因而也能更好地积累代谢产物。 因此，在实验室中，液体培养基主要用于生理、代谢研究及获 得大量菌体；在生产中，则用于大规模生产、发酵。 9K、 Leathen培养基由于有易被氧化的FeSO4 •7H2O，一 旦温度超过50℃，其中的Fe2+就会自发地快速氧化，并生成硫 酸高铁、水合硫酸铁及黄钾铁钒沉淀。解决的办法有： （1）调节培养基的pH值至1.5。在配制上述两种培养基时， pH值是一个很重要的考虑因素。pH值高则培养基经高温灭菌 后，会在瓶底生成沉淀，而使溶液浑浊；实验表明，在pH值低 的溶液中，培养基的各成分溶解度大些。 （2）减少铁盐及磷酸盐的用量并补充少量的酵母膏。调整后 的低磷酸盐培养基组成如下（g/L）：K2HPO4 0.4、 MgSO4 •7H2O 0.4、(NH4)2SO4 0.4、FeSO4 •7H2O 27.8、 酵母膏0.2（也可用谷胱苷肽 0.1或半胱氨酸0.1）；pH=1.5。 （3）将FeSO4 •7H2O溶液单独过滤灭菌，再与用高温灭菌的 培养基中的其他无机盐溶液混合。这种方法得到的培养基Fe2+ 被氧化成Fe3+的量少，培养基为浅绿色澄清溶液
2)半固体培养基( Semi-solid medium) 在液体培养基中加入0.2~0.5%的琼脂作 凝固剂,就可得到半固体培养基。半固体培养 基呈现出在容器倒放时不致流下、但在剧烈振 荡后能破散的状态。半固体培养基在微生物实 验中有许多独特的用途,如细菌的动力观察 在半固体直立柱中央进行细菌的穿刺接种, 观察细菌的运动能力),各种厌氧菌的培养及 菌种保藏等。绝大多数的浸矿细菌是能运动的, 可以通过这种方法来鉴定菌种
◼ 2) 半固体培养基（Semi-solid medium） 在液体培养基中加入0.2~0.5%的琼脂作 凝固剂，就可得到半固体培养基。半固体培养 基呈现出在容器倒放时不致流下、但在剧烈振 荡后能破散的状态。半固体培养基在微生物实 验中有许多独特的用途，如细菌的动力观察 （在半固体直立柱中央进行细菌的穿刺接种， 观察细菌的运动能力），各种厌氧菌的培养及 菌种保藏等。绝大多数的浸矿细菌是能运动的， 可以通过这种方法来鉴定菌种
3)固体培养基( Solid medium) 在液体培养基中加入1%~2%琼脂或5%~12%0 明胶作凝固剂,就可制成遇热可融化、冷却后则凝固 的固体培养基。固体培养基主要用于菌种的分离、菌 种保藏、鉴定等。T.f菌种在琼脂培养基上生长很弱 难以形成菌落,为菌种分离及遗传操作带来了很大困 难。出现这种情况的主要原因是琼脂在酸性条件下生 成的水解产物对菌体有毒害作用。针对这个问题可采 用多种方法克服: ■(1)适当地降低琼脂浓度,小于2%; (2)控制pH值在3.0左右,pH值太低,琼脂粉因水 解而不凝固;pH值太高,细菌的生长缓慢; (3)适当降低FeSO47H2O和磷酸盐的浓度,分别 不宜超过22.2q/和0.05g/L (4)选用质量较好的琼脂,如琼脂糖等;
◼ 3) 固体培养基（Solid medium） 在液体培养基中加入1%~2%琼脂或5%~12% 明胶作凝固剂，就可制成遇热可融化、冷却后则凝固 的固体培养基。固体培养基主要用于菌种的分离、菌 种保藏、鉴定等。T．f菌种在琼脂培养基上生长很弱， 难以形成菌落，为菌种分离及遗传操作带来了很大困 难。出现这种情况的主要原因是琼脂在酸性条件下生 成的水解产物对菌体有毒害作用。针对这个问题可采 用多种方法克服： ◼ （1）适当地降低琼脂浓度，小于2%； ◼ （2）控制pH值在3.0左右，pH值太低，琼脂粉因水 解而不凝固；pH值太高，细菌的生长缓慢； ◼ （3）适当降低FeSO4 •7H2O和磷酸盐的浓度，分别 不宜超过22.2g/L和0.05g/L； ◼ （4）选用质量较好的琼脂，如琼脂糖等；