●复制机理的复杂性 DS.DNA■SS.DNA能量的供求 构型的变化超螺旋 线状,开环状 多种酶类的互作國 Replisome 复制的准确性(修复,校正) 研究试材的特殊性(温度敏感型ts,突变抑制体系Su) DNA复制速度(Ecoi105bp/min,高速解旋112km/h?) 缺乏统一的模式(D.S.DNA,S.S.DNA, Linear dna…) DNA复制起始控制机理知之甚少
⚫ 复制机理的复杂性 D.S. DNA S.S. DNA 能量的供求 构型的变化 超螺旋 线状，开环状 多种酶类的互作 Replisome DNA复制起始控制机理知之甚少 复制的准确性 （修复，校正） 研究试材的特殊性 （温度敏感型ts，突变抑制体系Su） DNA复制速度 (E.coli 105 bp/min ，高速解旋 112 km/h ?) 缺乏统一的模式 (D.S. DNA, S.S. DNA, Linear DNA….)
2.2. replication origin direction E. CON DNA Restriction Restriction Transformation, plate on ampicillin Growth N。 growth
2.2. replication origin & direction
the character of replication origin B Bgll GGATCCTGgnTATTAAAAAGAAGATCTnTTTATTTAGAGATCTGTTnTATTGTGATCTCTTATTAGGATCGnnntnnnnTGTGATAAgnngGATCCnnn GG CACTGOCC G GC cccT CGCCAGGC TGT ACTCTCTA GTCG ACG AG GCTTGTCT GTCA t oriC c GCG CGT A T GA TCGTGTTG GTGATTATTCAT 101 150 nTTtAAGATCAAnnnnnTggnAAGGATCncTAnCTGTGAATGATCGGTGATCCTGGnCCGTATAAGCTGGGATCAnAATGng GGnTT/ TACACAgCICAA T T CAACC GGA AT A A G AG G A T TGCGT GGA C GGTAC A T A T ACGCT AAG ACA T TT G AA GGG T G T G CCGTT AAG GC TT TA A A G G A GAGAA GGCGTT A C TT TG T GGA AAAncgnACaaCGGTTaTTCI IGGATAACTACCGGTTGATCCAAGCTTTtnAnCAgAGTTCCACAntn GAnnGcnn-GAT: Consensus sequence CTGA AA A CCTGA G GTA TC CAC. Escherichia GTGA AA CC C G T ATG TC CAC. Salmonella GCAT TC GAAA TG G GG GAA AGCTGOG TTCAGG AA TA G T GAA AA TAT. ACGC TCG G A G G C TTA ACCAGAA TA G T TTCA CT COG-AErwinia
⚫ the character of replication origin oriC
245bp minimal origin of replication rich at dna polymerase naA)binding site >“呼吸现象” DNA复制原点处氢键迅速断裂与再生,导致两条 DNA链不断解链与聚合,形成瞬间的单泡状结构的过 程。在富含AT的区内九为明显 replication origin两侧基因的转导频率高 复制模式多样
➢ “呼吸现象” DNA复制原点处氢键迅速断裂与再生,导致两条 DNA链不断解链与聚合, 形成瞬间的单泡状结构的过 程。在富含AT的区域内尤为明显 ➢ replication origin 两侧基因的转导频率高 ➢ 复制模式多样 ➢ 245bp minimal origin of replication ➢ rich AT & DNA polymerase (DnaA) binding site
单起点、单方向 多起点、单方向 单起点、双方向 多起点、双方向
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