(二)复制的方式 DNA的复制 如何证明半保留复制 1958年, Meselson证明:用,15NH4C唯一氮源 培养大肠杆菌,之后,用14NH4C培养,然后进行 cscl2进行密度梯度离心。由于15NH4C密度大于 14NH4c,因此,形成不同区带,经过若干代培养 后,两个14NH4C区带增多
如何证明半保留复制 (二) 复制的方式 一. DNA的复制 1958年，Meselson 证明：用，15NH4Cl唯一氮源 培养大肠杆菌，之后，用14NH4Cl培养，然后进行 CsCl2进行密度梯度离心。由于15NH4Cl密度大于 14NH4Cl，因此，形成不同区带，经过若干代培养 后，两个14NH4Cl区带增多
sCl梯度 亲代15N-DNA I5N-DNA (a) Heavy (重) DNA (ON Original parent AN N-DNA 14N, 5N-DNA (中等) brid dna b)(15N-141 F一“NDNA First-generation daughter molecules 14N, 5N-DNA i 1 14N-DNA (轻) IN, I5N-DNA (中等) DNA O 14 (c) Hybrid DNA Second-generation daughter molecules
(二)复制的方式 DNA的复制 CsCl梯度 亲代N-DNA I5N-DNA IN-DNA (重 N-DNA AN N-DNA E DNA N,N-DNA ISN-DNA‖N-DNA (中等) IN-DNA 1,111 IN, SN-DNAI 1 H IN-DNA -IN-DNA (轻) IN, ISN-DNA 一1N-DNA (中等) 半保留复制 全保留复制
(二) 复制的方式 一.DNA的复制 半保留复制 全保留复制
(三)复制反应注意点 DNA的复制 DNA复制除入DNA聚合酶,DNA模板 dNTP外还需要多种蛋白质因子、引物 Mg2等 特点: A对利福平不敏感 B核糖核酸代替脱氧核糖核酸
(三) 复制反应注意点 DNA复制除入DNA聚合酶, DNA模板, dNTP外,还需要多种蛋白质因子、引物 、Mg2+等. 一. DNA的复制 特点： A 对利福平不敏感 B 核糖核酸代替脱氧核糖核酸
(四)参与复制的酶和蛋白质 DNA的复制 1.DNA聚合酶 DNA polymease) 催化活性 DNA聚合酶5→3·3-55→3 功能 聚合核酸外切核酸外切 DNA聚合 切去引物RNA,补 原酶I 上正确的DNA片段 核DNA聚合 生酶工 与修复有关(活性低) 物DNA聚合 负责链的延长 酶Ⅲ (活性高)
DNA聚合酶 催化活性 5'→3' 功 能 聚合 3'→5' 核酸外切 5'→3' 核酸外切 原 核 生 物 DNA聚合 酶Ⅰ ＋ ＋ ＋ 切去引物RNA，补 上正确的DNA片段 DNA聚合 酶Ⅱ ＋ ＋ 与修复有关(活性低) DNA聚合 酶Ⅲ ＋ ＋ 负责链的延长 (活性高) (四)参与复制的酶和蛋白质 一.DNA的复制 1. DNA聚合酶(DNA polymease)