细胞融合剂: PEG:分子量4000的PEG是最常用的细胞融合剂 作用机理:诱导细胞膜上脂类物质结构重排,使细胞 膜易打开而有助于细胞融合 作用特点:随机发生的,不同厂商、批号、分子量的 PEG,其纯度与毒性有所不同
细胞融合剂: PEG:分子量4000 的PEG是最常用的细胞融合剂 作用机理:诱导细胞膜上脂类物质结构重排,使细胞 膜易打开而有助于细胞融合 作用特点:随机发生的,不同厂商、批号、分子量的 PEG,其纯度与毒性有所不同
培养骨髓瘤细胞: 选择对数生长期的细胞进行传代培养 细胞形态:浑圆、透亮、均一、排列整齐 避免细胞返祖:定期用8-AG处理细胞 注意事项:切忌过多传代培养,可将细胞分装冻存 于-80°℃或液氮及干冰中 免疫脾细胞的制备: 1×10的淋巴细胞 无菌手术
培养骨髓瘤细胞: 选择对数生长期的细胞进行传代培养 细胞形态:浑圆、透亮、均一、排列整齐 避免细胞返祖:定期用8-AG处理细胞 注意事项:切忌过多传代培养,可将细胞分装冻存 于-80℃或液氮及干冰中 免疫脾细胞的制备: 1×108的淋巴细胞 无菌手术
饲养细胞: 细胞密度过低不利于细胞生长繁殖 常用小鼠腹腔细胞作饲养细胞 其中MQ还有清除死亡细胞的作用 饲养存活一般不超过2周,不影响杂交瘤细胞 的纯化
饲养细胞: 细胞密度过低不利于细胞生长繁殖 常用小鼠腹腔细胞作饲养细胞 其中MQ还有清除死亡细胞的作用 饲养存活一般不超过2周,不影响杂交瘤细胞 的纯化
饲养细胞 Macrophage
。 饲养细胞
融合方法 骨髓瘤细胞与淋巴细胞(1:3) 50%PEG1min内加完: 2min内加10ml培养液
骨髓瘤细胞与淋巴细胞(1:3) 50% PEG 1min内加完; 2min内加10ml培养液 融合方法