PCR聚合酶链式反应Chain ReactionPolymerase
聚合酶链式反应 PCR Polymerase Chain Reaction
PCR反应体系的成分及加样程序：编号样品用量（ul)备注(1)双蒸水14.2ul(2)2ulbuffer(3)NTP0.8ul(4)引物0.5ul上、下游引物已混合(5)0.5ulTaqDNA聚合酶用5号管直接加其它各样(6)2ul模板DNA合计20 ul大肠杆菌特异性引物序列：上游引物：5'-GGAGCAAACAGGATTAGATACCC-3下游引物：5'-AACCCAACATTTCACAACACG-3加样完毕后，离心或手指轻弹使溶液完全混匀
PCR反应体系的成分及加样程序： 加样完毕后，离心或手指轻弹使溶液完全混匀。 编号 样品 用量（ul） 备注 （1） 双蒸水 14.2ul （2） buffer 2ul （3） dNTP 0.8ul （4） 引物 0.5ul 上、下游引物已混合 （5） TaqDNA聚合酶 0.5ul 用5号管直接加其它各样 (6) 模板DNA 2ul 合计 20 ul 大肠杆菌特异性引物序列： 上游引物：5'-GGA GCA AAC AGG ATT AGA TAC CC-3' 下游引物：5'-AAC CCA ACA TTT CAC AAC ACG -3
PCR原理及反应参数：95℃4min（预热，激活DNA聚合酶）-95℃30sec（热变性，使模板DNA完全变性成为单链，同时使引物自身和引物之间的发荚结构或局部双链消除：）30个循环58℃30sec退火，将温度下降至适宜温度，使引物与模板DNA退火结合）72℃30sec（延伸，将温度升高，热稳定DNA聚合酶以dNTP为底物催化新生DNA链延伸。）72℃5min（完全延伸）4℃暂时保存扩增总时间为1小时10分钟，电泳时间约为20分钟
PCR原理及反应参数： 95℃ 4min(预热，激活DNA聚合酶） 72℃ 5min(完全延伸） 4 ℃ 暂时保存 95℃ 30sec (热变性，使模板DNA完全变性成为单链，同时使引物 自身和引物之间的发荚结构或局部双链消除；） 58 ℃ 30sec (退火，将温度下降至适宜温度，使引物与模板DNA退 火结合） 72℃ 30sec (延伸，将温度升高，热稳定DNA聚合酶以dNTP为底物 催化新生DNA链延伸。） 30个循环 扩增总时间为1小时10分钟，电泳时间约为20分钟
PCR:PolymeraseChainReaction30-40cyclesof3steps:Step 1: denaturationXXXXIXXXXX1minut94°℃Step 2 : annealing45seconds54°℃m3forward and reverse1primers !!!Step3:extension2minutes72°℃onlydNTP's(Andy Vierstracte 1999)
本质：是体外以2n-1方式快速扩增DNA的方法。4thcyclewantedgene=Exponentialamplification3thcycle2nd eyeleC-Istcycle35thcycletemplateDNAm二I二22-35=34billioncopies2copics4copies16copies8copies(AndyVierstracte2001)
本质：是体外以2n-1方式快速扩增DNA的方法