C35.040 中华人民共和国国家标准 Gt￥℃B509356-293 食品中合成着色剂的测定 Determination of synthetic colour in foods 2003-08-11发布 2004-01-01实施 串朵靠秘器委贵雲发布 2
GB/T5009.35-2003 前 言 本标准代替GB/T5009.35-一1996食品中合成者色剂的测定方法》 本标准与GB/T5009.35一1996相比主要修改如下： 一修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《食品中合成兼色剂的测定： -按照GB/T20001.4一2001《标准缩写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的结构进行了 修改 -增加了示被极谱法作为第三法。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准第一法由天律巾食品卫生监督检验所，辽宁省食品卫生监督检验所、宁艾回族自治区卫生防 疫站、西安市卫生防疫站负责起草。 本标准第二法由卫生部食品卫生监督检验所负资起草 木标准第三法由卫生部食品卫生监督检验所负费起草， 本标准于1985年首次发布，于1996年第一次修订，本次为第二次修订。 276
GB/T5009.35-2003 食品中合成着色剂的测定 1范围 本标准规定了食品中合成着色剂的测定方法。 本标准适用于食品中合成着色剂的测定。 本方法检出限：新红5ng、柠檬黄4g、苋菜红6g、网脂红8n唱、日落黄7ng、赤莓红18ng、亮燕 26ng,当进样量相当0.025g时，检出浓度分别为0.2mg/kg10.16mg/kg0.24mg/kg0.32mg/kg: 0.28 mg/kg:0.72 mg/kg:1.04 mg/kg. 第一法高效液相色谱法 2原理 食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液液分配法提取，制成水溶液，注人高效液相色谱仪，经 反相色谱分离，根据保留时间定性和与蜂面积比较进行定量。 3试剂 3.1正已烷。 3.2盐酸 3.3乙酸， 3.4甲醇：经0.5um滤膜过滤。 3.5聚酰胺粉（尼龙6）：过200日筛。 3.6乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL,溶解，经0.45m滤膜过滤 3.7氨水：量取氨水2mL,加水至100nL,混匀。 3.8氨水-乙酸铵溶液(0.02mol/L):量取氢水0.5mL,加乙酸铵溶液(0.02mol/L)至1000mL, 混匀。 3.9甲醇-甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60mL,甲酸40ml,混匀. ,柠檬酸溶波：称取20g柠檬酸(CHO,·HO》,加水至100mL,溶解混匀 1)溶液 量取无水乙醇70mL氨水20mL 水10mL,混匀。 3.12三正辛胺正丁醇溶液(5%)：景取三正辛胺5mL,如正丁醇至100mL,混匀. 3.13饱和硫酸纳溶液。 3.14硫酸钠溶液(2g/L), 3.15DH6的水，水加拧整酸溶液调pH值到6。 3.16合成者 剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为10%质量的柠黄、日落黄、苋菜红、因脂红 新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.1008，置100mL容量瓶中，加pH6水到刻度，配成水溶 液(1.00g/mL). 3.17合成着色剂标准使用液：临用时上述溶液（或将3.16）加水稀释20倍，经0.45m被膜过滤，配 成每毫升相当于50.0g的合成者色剂。 4仪器 高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长。 277
GB/T5009.35-2003 5分析步骤 5.1试样处理 5.1.1桔子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.0g一40.0g,放入100mL烧杯中，含二氧化碳试样加 热驱除二氧化碳。 5.1.2配制酒类：称取20.0g~40.0g,放100mL烧杯中，加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。 5.1.3硬钻、蜜伐类、淀粉软糖等：称取5.00g~10.00g粉碎试样，放人100mL小烧杯中，加水 30mL,温热溶解 若试样溶液pH值较高，用柠檬酸溶液调pH值到6左右。 5.1.4巧克力豆及着色衣制品：称取5.00g~10.00,放入100mL小烧杯中，用水反复洗涤色素 到试样无色素为止，合并色素漂洗液为试样溶液， 5.2色素提取 5.2.1聚酰胺吸附法：试样溶液加柠棕酸溶液调pH值到6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水两 成粥状，倒人试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃pH=4的水洗涤3次一5次，然后用 甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次~5次（含赤裤红的试样用5.2.2法处理），再用水洗至中性，用乙醇-氨水 水混合溶被解吸3次~5次，每次5mL,收解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL 经0.5m滤膜过滤，取10L进高效液相色谱仪。 5.2.2液-液分配法（适用于含赤藓红的试样）：将制备好的试样溶液放入分液漏斗中，加2L盐酸、三 正辛蔽正丁醇溶液(5%)10mL~20mL,振摇提取，分取有机相，重复提取至有机相无色，合并有机相， 用饱和破酸钠溶液洗2次，每次10mL,分取有机相，放蒸发皿中，水裕加热浓缩至10mL,转移至分 漏斗中，加60mL正已烷，混匀，加氨水提取2次~3次，每次5mL,合并氨水溶液层（含水溶性酸性色 素)，用正已烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。经就聪 0.45m过滤，取10L进高效液相色谱仪 5.3高效液相色谱参考桌件 5.3.1柱：YWG-C.104m不锈钢柱4.6mm(i.d)×250mm. 5.3.2流动相：甲醇：乙酸铵溶液(pH=4,0.02mol/L). 5.3.3 梯度洗脱：甲醇：20%35%，3%/amin,35%98%，9%/min,98%继续6min 5.3.4流速：lmL/min. 5.3.5紫外检测器，254nm波长， 5.4测定 取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高教液相色谱仪，根据保留时间定性，外标蜂面 积法定量。 5.5结果计算 试样中着色剂的含盘按式(1)进行计算。 式中： X一试样中着色剂的含量，单位为克每千克(g/kg)； A—样液中着色剂的质盘，单位为微克(g): 进样体积，单位为意升(mL) 试样稀释总体积，单位为毫升(mL), 试样质量，单位为克(g)。 计算结果保留两位有效数字。 278
GB/T5009.35-2003 5.6精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%， 5.7其他 - 图1八种着色剂色谥分离图 第二法薄层色谱法 6原理 水溶性酸性合成者色剂在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谐法或薄层 色法进行分离后，与标准比较定性，定盘 最低检出量为50g。点样量为1L时，检出浓度约为50mg/kg 7试剂 ,7.1石油醚：沸程60℃90℃. 7.2甲醇。 7.3聚酰胺粉（尼龙6）：200目. 7.4硅胶G 7.5酸：(1+10) 6甲 酸溶 ：(6+4)。 77氢化销溶(60gLD。 7.8海砂：先用盐酸(1+10)煮沸15min,用水洗至中性，再用氢氧化钠溶液(50g/L)煮沸15min,用 水洗至中性，再于105℃干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。 7.9乙醇(50%). 7.10乙醇-氨溶液：取1mL氨水，加乙醇(70%)至100mL. 总