第二节 载体 *本质：DNA 携带外源DNA进入受体细胞的运载工具。 *分类： 克隆载体 质粒 入噬菌体 粘性质粒 M13噬菌体 表达载体 大肠杆菌表达载体 哺乳动物表达载体 16
16 *分类： 克隆载体 质粒 入噬菌体 粘性质粒 M13噬菌体 表达载体 大肠杆菌表达载体 哺乳动物表达载体 第二节 载体 *本质：DNA 携带外源DNA进入受体细胞的运载工具
质粒载体 大肠杆菌质粒载体PBR322 枯草杆菌质粒载体PNC3 酵母菌质粒载体 农杆菌Ti质粒载体Ti 噬菌体载体 )噬菌体载体 Cos噬菌体载体 病毒载体 SV40病毒载体 乳头瘤病毒载体 17
17 质粒载体 大肠杆菌质粒载体 PBR322 枯草杆菌质粒载体 PNC3 酵母菌质粒载体 农杆菌Ti质粒载体 Ti 噬菌体载体 噬菌体载体 Cos噬菌体载体 病毒载体 SV40病毒载体 乳头瘤病毒载体
常用的克隆载体 质粒(plasmid) 种类很多，但作为克隆载体须具备。 (1) 分子量相对较小，在细菌中稳定存在， 拷贝指数高。 (2 具有遗传标记： 如抗生素性基因 B一半乳糖基因(LacZ) (3)具有多个酶的单一切点。称多克隆位点( multiple cloning sites MCS) 如PBR322(人工合成)4.3Kb:含AmPY( 氨卞青霉素)、Tet四环素) 24个单一切点 18
18 ⑴ 分子量相对较小，在细菌中稳定存在， 拷贝指数高。 ⑵ 具有遗传标记： 如抗生素性基因 —半乳糖酶基因（LacZ） ⑶ 具 有 多 个 酶 的 单 一 切 点 。 称 多 克 隆 位 点 （ multiple cloning sites , MCS） 如 PBR322(人工合成)4.3Kb ：含 AmP ( 氨卞青霉素)、 Tet (四环素) 24个单一切点 一 常用的克隆载体 1. 质粒（plasmid）： 种类很多，但作为克隆载体须具备
PBR322 Clal EcoRI Hindlll EcoRV BamHI 0 Sphl Sall Pvul 4 Pstl Amp Tetr Xmalll Nrul 1 3 ori 2
19 PBR322
质粒的构建 =○○I =○OI ■ PSC101 RSF101O Tetracycliner streptomycin ∈oORI ∈OORI DNA ligase E○OI Recombinant →NA ○ORI Transform bacteria Tetracycliner
20 质粒的构建