吸收后再通过酸碱滴定，测定出氨气的量，最后换算为植物材料中蛋白质的含量。 三.实验设备凯氏烧瓶50ml:圆底烧瓶1000ml:电炉；锥形烧瓶100ml:微量滴定管 5ml、刻度0.0lml:容量瓶50ml:移液管5ml:量筒10ml:洗耳球；凯氏微量蒸馏装置、胶管 等。 四.试剂(1)浓硫酸一过氧化氢一水混合液(2：1：3)在100ml水中缓慢加入浓硫酸 200ml,冷却后再加入30%过氧化氢300ml,混匀备用。此液存放阴凉处可保存1个月。 (2)混合催化剂硫酸铜(CuS04·5H20)10g,疏酸钾(A.R)100g,硒粉0.2g,中研细使通过 40目筛，混匀后备用。 (3)40%氢氧化钠溶液 (4)2%明酸溶液 (5)0.01mol/L盐酸溶液 (6)甲基红乙醇溶液 0.1甲基红溶于75m195%乙醇中（先在研钵中加乙醇研磨）。 (⑦)次甲基蓝乙醇溶液 0.1g次甲基蓝溶于80m195%乙醇中。临用时将以上两液按2：1比例混合即成。在酸碱 呈紫红色，在pH5.5时溶液无色，在碱域呈绿色。 五.实验步骤 ()消化按照含有10~30mg粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样0.2~0.3g(W 精确到0.0001g),用蜡光纸卷着倒人50ml凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g,同时加入硫酸一 过氧化氢一水混合液3一5ml,稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱内加热进行消化。开始时 用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚里的2/3，待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微 沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状时，再继续加热沸腾l0mi,取出待消化液冷却至室温 后，加水10~20ml,再待溶液温度降到室温后，干净地转人50ml容量瓶中，加水稀释至刻 度，混匀备用。 (2)蒸馏 按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃 片，加5滴混合指示剂，加几滴酸液使水呈紫红色，连接4,1,2，并检查有无漏气处。 量取30ml1%硼酸溶液注入锥形瓶3内，加混合指标剂2滴，使冷凝管下端插入液面下 1cm处。量取稀释的消化液5ml,由漏斗5注入瓶1内，再加水10ml,冲洗漏斗5。量取40% 氢氧化钠溶液ml,提起活塞注入瓶1‘内，立即用水2一5ml冲洗漏斗5，旋紧活塞。这时瓶 1内溶液总体积不要超过其容量的一半。 打开簧夹7，关闭活塞6，加热烧瓶8，待瓶1内溶液开始沸腾时计时，经2mn降低瓶3， 使冷凝管下端露出液面，再蒸馏lmin后，用水冲洗管下端。 蒸馏结束后，掐紧簧夹7，断绝蒸气，使瓶1内溶液全部吸人管4中，放松簧夹7，从 漏斗5加入蒸馏水40一50ml,再通蒸气加热和回流，使瓶1洗涤一次备用。 (3)滴定 用0.01mol/L盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止 为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验
吸收后再通过酸碱滴定，测定出氨气的量，最后换算为植物材料中蛋白质的含量。 三．实验设备 凯氏烧瓶 50ml；圆底烧瓶 1000ml；电炉；锥形烧瓶 l00ml；微量滴定管 5ml、刻度 0.0lml；容量瓶 50ml；移液管 5ml；量筒 l0ml；洗耳球；凯氏微量蒸馏装置、胶管 等。 四．试剂(1) 浓硫酸一过氧化氢一水混合液(2：1：3) 在 100ml 水中缓慢加入浓硫酸 200ml，冷却后再加入 30％过氧化氢 300ml，混匀备用。此液存放阴凉处可保存 1 个月。 (2) 混合催化剂 硫酸铜(CuS04·5H20)10g，硫酸钾(A．R)100g,硒粉 0.2 g,中研细使通过 40 目筛，混匀后备用。 (3) 40％氢氧化钠溶液 (4) 2％硼酸溶液 (5) 0.01mol／L 盐酸溶液 (6) 甲基红乙醇溶液 0.1 甲基红溶于 75m195％乙醇中(先在研钵中加乙醇研磨)。 (7) 次甲基蓝乙醇溶液 0.1g 次甲基蓝溶于 80m195％乙醇中。临用时将以上两液按 2：1 比例混合即成。在酸碱 呈紫红色，在 pH5．5 时溶液无色，在碱域呈绿色。 五．实验步骤 (1) 消化 按照含有 10～30mg 粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样 0．2～0．3g(W， 精确到 0．0001g)，用蜡光纸卷着倒人 50ml 凯氏烧瓶中，加混合指示剂 1g，同时加入硫酸一 过氧化氢一水混合液 3～5ml，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱内加热进行消化。开始时 用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚里的 2／3，待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微 沸。消化到溶液呈浅蓝绿色的透明状时，再继续加热沸腾 10min，取出待消化液冷却至室温 后，加水 10～20ml，再待溶液温度降到室温后，干净地转人 50ml 容量瓶中，加水稀释至刻 度，混匀备用。 (2) 蒸馏 按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。在烧瓶 8 内加水 400ml 和少量碎玻璃 片，加 5 滴混合指示剂，加几滴酸液使水呈紫红色，连接 4，1，2，并检查有无漏气处。 量取 30m1 1％硼酸溶液注入锥形瓶 3 内，加混合指标剂 2 滴，使冷凝管下端插入液面下 lcm 处。量取稀释的消化液 5ml，由漏斗 5 注入瓶 1 内，再加水 10ml，冲洗漏斗 5。量取 40％ 氢氧化钠溶液 lml，提起活塞注入瓶 1‘内，立即用水 2～5ml 冲洗漏斗 5，旋紧活塞。这时瓶 1 内溶液总体积不要超过其容量的一半。 打开簧夹 7，关闭活塞 6，加热烧瓶 8，待瓶 1 内溶液开始沸腾时计时，经 2min 降低瓶 3， 使冷凝管下端露出液面，再蒸馏 lmin 后，用水冲洗管下端。 蒸馏结束后，掐紧簧夹 7，断绝蒸气，使瓶 1 内溶液全部吸人管 4 中，放松簧夹 7，从 漏斗 5 加入蒸馏水 40～50ml，再通蒸气加热和回流，使瓶 1 洗涤一次备用。 (3) 滴定 用 0．01mol／L 盐酸溶液滴定瓶 3 中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。 为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验
六.结果计算 粗蛋白质的干基含量按下列公式计算： 50 10000 粗蛋白质（干基%）=(V1.Vo)×N×14XP× -X- W(100-M 式中：V一一蒸馏时取用稀释的消化液体积ml) V1一一实验用去的盐酸溶液体积(ml): Vo-- -空白试验用去的盐酸溶液体积(m1): N -盐酸溶液的当量浓度.(moL): 14一一每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数： 蛋白质换算系数（小麦5.7，其他谷物及豆类6.25）： w一一试样重量(mg): M 一试样水分百分率(%)。 双试验结果允许差：粗蛋白质含量在15.0%以下时，不超过0.2%：粗蛋白质含量在15.1% 以上时，不超过0.4%。求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后第一位。 实验七、种子引发的效应 一、目的要求 了解种子引发的基本技术和引发对种子的影响。莴苣种子在35℃条件下吸胀发芽会进入 热休眠，引发处理可以减轻其热休眠，或利用大豆种子进行PEG处理，观察抗吸胀冷害的效 果。 二、材料与方法 1.材料和用具 莴苣(Lactucasativa L.)种子，培养皿，聚乙二醇(PEG)8000(分子量)，发芽箱等。 2.种子引发 种子置于9cm培养皿内，每皿置放50粒种子，加一125MPa参诱势的聚乙二醇PEG)8000 溶液5ml,培养皿用薄膜(Parafilm)密封后，在发芽箱20℃黑暗条件下7d.每处理4次重复， 每重复50粒种子。引发后种子在自米水下漂洗5min,用无菌水冲洗后，用发芽纸吸干，将 种子在室内回千1d。大豆种子可用30%PEG吸胀处理45~90inm。 3.种子发芽 在9cm培养皿内放4层发芽纸，加4ml蒸馏水，每m50粒种子。发芽试验在35℃和20℃ 黑暗下进行7。每处理4次重复，每重复50粒种子。分别用引发和未引发的种子置床。在 发芽的第一天，每6h记录发芽种子数，第2天至第7每天记录1次。根据发芽种子数，计 算发芽率、发芽指数和发芽平均时间 Σ(fx) (- -)f为xh后的发芽种子数，x为发芽小时数
六．结果计算 粗蛋白质的干基含量按下列公式计算： 50 10000 粗蛋白质（干基%）= （V1 – Vo）×N×14×P×———×—————— V W（100- M） 式中: V——蒸馏时取用稀释的消化液体积(m1)； V1——实验用去的盐酸溶液体积(m1)； Vo——空白试验用去的盐酸溶液体积(m1)； N——盐酸溶液的当量浓度．(mol/L)； 14——每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数； P——蛋白质换算系数(小麦 5.7，其他谷物及豆类 6.25)； W——试样重量(mg)； M——试样水分百分率(％)。 双试验结果允许差：粗蛋白质含量在 15.0％以下时，不超过 0.2％；粗蛋白质含量在 15.1％ 以上时，不超过 0.4％。求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后第一位。 实验七、 种子引发的效应 一、目的要求 了解种子引发的基本技术和引发对种子的影响。莴苣种子在 35℃条件下吸胀发芽会进入 热休眠，引发处理可以减轻其热休眠，或利用大豆种子进行 PEG 处理，观察抗吸胀冷害的效 果。 二、材料与方法 1．材料和用具 莴苣(Lactucasativa L．)种子，培养皿，聚乙二醇(PEG)8000(分子量)，发芽箱等。 2．种子引发 种子置于 9cm培养皿内，每皿置放 50 粒种子，加—1.25MPa 渗透势的聚乙二醇(PEG)8000 溶液 5ml，培养皿用薄膜(Parafilm)密封后，在发芽箱 20℃黑暗条件下 7d．每处理 4 次重复， 每重复 50 粒种子。引发后种子在自来水下漂洗 5min，用无菌水冲洗后，用发芽纸吸干，将 种子在室内回干 1d。大豆种子可用 30％PEG 吸胀处理 45～90inm。 3．种子发芽 在 9cm 培养皿内放 4 层发芽纸，加 4ml 蒸馏水，每皿 50 粒种子。发芽试验在 35℃和 20℃ 黑暗下进行 7d。每处理 4 次重复，每重复 50 粒种子。分别用引发和未引发的种子置床。在 发芽的第一天，每 6h 记录发芽种子数，第 2 天至第 7d 每天记录 1 次。根据发芽种子数，计 算发芽率、发芽指数和发芽平均时间 ∑ (fx) ( = --------------),f 为 xh 后的发芽种子数，x 为发芽小时数
∑f 三、作业 比较在20℃发芽和35℃发芽条件下引发和未引发种子发芽和发芽速度的差异 实验八种子散落性测定 一、目的和要求 通过对种子静止角和自流角的测定，加深对种子散落性概念的理解，并掌握正确仪器的 使用 二、材料和用具 1.材料各种农作物种子：水稻、小麦、大豆、油菜等。 2.用具 (1)长方形玻璃缸、玻璃缸盖、量角器。 (2)自流角测量仪、玻璃板、天秤。 三、方法和步骤 1.静止角的测定 (1)将种子倒人长方形玻璃缸中以其高度的1/3为宜。 (2)把玻璃缸内的种子平整后，用玻璃盖盖上，然后慢慢地将它向一侧倾倒，使种子形成 一个斜面而与水平面成一定角度，即为静止角。 (3)用量角器测量这个角度并加记录。 (④)用同法重复3次，取平均值。 2,自流角的测定 (1)称取种子10g,置于自流角测量仪玻璃板的一端。 (2)将玻璃板有种子的一端慢慢提起，使种子滚落，当种子开始滚落时即记下玻璃板与水 平面所成之角度，为始角。 (3)再记下种子绝大部分滚落时所成之角度，为终角。 (4始角与终角范围内的角度为自流角。 (5)用同法重复3次，取平均值。 3.种子对仓壁侧压力的计算 根据测得的有关数据，计算种子对仓壁的测压力。 计算公式为： 1 _mhe tg?(450-2 P= 2 式中：P一一侧压力kg/m: m一一种子容重(kg/m3):
∑f 三、作业 比较在２０℃发芽和３５℃发芽条件下引发和未引发种子发芽和发芽速度的差异。 实验八 种子散落性测定 一、目的和要求 通过对种子静止角和自流角的测定，加深对种子散落性概念的理解，并掌握正确仪器的 使用 二、材料和用具 1．材料 各种农作物种子：水稻、小麦、大豆、油菜等。 2．用具 (1) 长方形玻璃缸、玻璃缸盖、量角器。 (2) 自流角测量仪、玻璃板、天秤。 三、方法和步骤 1．静止角的测定 (1) 将种子倒人长方形玻璃缸中以其高度的 1／3 为宜。 (2) 把玻璃缸内的种子平整后，用玻璃盖盖上，然后慢慢地将它向一侧倾倒,使种子形成 一个斜面而与水平面成一定角度，即为静止角。 (3) 用量角器测量这个角度并加记录。 (4) 用同法重复 3 次，取平均值。 2．自流角的测定 (1) 称取种子 10g，置于自流角测量仪玻璃板的一端。 (2) 将玻璃板有种子的一端慢慢提起，使种子滚落，当种子开始滚落时即记下玻璃板与水 平面所成之角度，为始角。 (3) 再记下种子绝大部分滚落时所成之角度，为终角。 (4) 始角与终角范围内的角度为自流角。 (5) 用同法重复 3 次，取平均值。 3．种子对仓壁侧压力的计算 根据测得的有关数据，计算种子对仓壁的测压力。 计算公式为： 1 a P = —— mh2 tg2（450 - —— ） 2 2 式中： P——侧压力(kg／m)； m——种子容重(kg／rn3 )；
h一一种子堆高度(m): tg一一正切（函数）： a一一静止角( 四、作业 根据测定的静止解和自流角，计算种子对仑壁的侧压力。 实验九、扦样 一、目的和要求 (1)熟悉各种扦样器和分样器的构造及使用方法。 (②)掌握袋装和散装种子批的扦样方法。 (3)掌握小容器（小包装）种子批扦样方法。 二、材料和用具 1.材料 水稻、小麦或玉米等袋装或散装种子批或小包装种子批。 2.用具单管扦样器、双管扦样器、长柄短筒扦样器、圆锥形杆样器、羊角扦、各式分 样器、分样板、样品瓶、样品袋等。 三、方法和步骤 1.划分种子批 2.扦样方法 ()袋装种子批扦样法首先根据欲检种子袋数确定应扦样袋数：其次均匀设置扦样点： 然后从各扦样点袋中扦取初次样品。 ②)散装种子批扦样法先按种子堆水平面积分区设点：再按种子堆高度分扦样层：然后 由上到下扦取初次样品。 (3)小包装种子批扦样法首先将小包装种子批合并成100kg为一个扦样的基本单位，然 后确定从每个基本单位中取出数量，并取出作为初次样品。 3.配置混合样品各袋或各点或各扦样单位扦出的初次样品，经感官粗查，只要质量大 体一致就可将它们充分混合而组成混合样品。 4.分双送验样品用分样器或分样板从昆合样品中分出规定数量（或略多）的送险样品， 在全面检验时由3份送验样品。其中一份供净度、发芽测定样品用，可用清洁的纸袋或布袋 包装，另一份供水分测定样品用，须用密封容器包装，第三份作为品种鉴定用。附上扦样证 明书，应尽快于24h内送往检验室
h——种子堆高度(m)； tg——正切(函数)； a——静止角( ０ ) 四、作业 根据测定的静止解和自流角，计算种子对仑壁的侧压力。 实验九、 扦 样 一、目的和要求 (1) 熟悉各种扦样器和分样器的构造及使用方法。 (2) 掌握袋装和散装种子批的扦样方法。 (3) 掌握小容器(小包装)种子批扦样方法。 二、材料和用具 1．材料 水稻、小麦或玉米等袋装或散装种子批或小包装种子批。 2．用具 单管扦样器、双管扦样器、长柄短筒扦样器、圆锥形扦样器、羊角扦、各式分 样器、分样板、样品瓶、样品袋等。 三、方法和步骤 1．划分种子批 2．扦样方法 (1) 袋装种子批扦样法 首先根据欲检种子袋数确定应扦样袋数；其次均匀设置扦样点； 然后从各扦样点袋中扦取初次样品。 (2) 散装种子批扦样法 先按种子堆水平面积分区设点；再按种子堆高度分扦样层；然后 由上到下扦取初次样品。 (3) 小包装种子批扦样法 首先将小包装种子批合并成 100kg 为一个扦样的基本单位，然 后确定从每个基本单位中取出数量，并取出作为初次样品。 3．配置混合样品 各袋或各点或各扦样单位扦出的初次样品，经感官粗查，只要质量大 体一致就可将它们充分混合而组成混合样品。 4. 分取送验样品 用分样器或分样板从混合样品中分出规定数量(或略多)的送验样品， 在全面检验时由 3 份送验样品。其中一份供净度、发芽测定样品用，可用清洁的纸袋或布袋 包装，另一份供水分测定样品用，须用密封容器包装，第三份作为品种鉴定用。附上扦样证 明书，应尽快于 24h 内送往检验室