(4)足细胞:又称 Sertoli细胞、支持细胞、营养细胞。体积较大而细长。但数量较少 属体细胞。呈辐射状排列在曲精细管中,分散在各期生殖细胞之间,其底部附着在曲精细管 的基膜上,游离端朝向管腔,常有许多各精子嵌在上面。该细胞高低不等,界限不清。细胞 核较大,位于细胞的基部,着色较浅,具有明显的核仁,但不显示分裂现象。由于它的顶端 有数个精子伸入胞浆内,故一般认为此种细胞是对生精细胞起着支持、营养、保护等作用。 足细胞失去功能,精子便不能成熟 (5)生精细胞(生殖细胞):数量比较多,成群的分布在足细胞之间,大致排列成3 7层(同心圆排列)。根据不同发育阶段及其形态特点又可分为:精原细胞、初级精母细胞、 次级精母细胞、精(子)细胞和精子 ①精原细胞:位于最基层,紧贴基膜。细胞体积较小,呈圆形,常有分裂现象。是精子 生成的干细胞。细胞质比较清亮。细胞核大而圆,富含染色质,因而着色较深。 初级精母细胞:位于精原细胞上面,排成几层,常显示有分裂现象。细胞体积较大, 呈圆形。细胞核呈球形,富有染色质,故着色较深。分裂时,因染色体所处不同的活动时期 而呈线状、棒状或粒状。在最初阶段与精原细胞不易区别。随着细胞离开基膜向管腔移动, 同时胞浆不断增多,胞体不断变大,具有明显的胞核。 ③次级精母细胞:位于初级精母细胞的内侧。体积较小。细胞呈圆形。细胞核为球形, 染色质细粒状。由于该细胞很快分裂为两个精子细胞,因而在切片上很难找到它。 精子细胞:位于精母细胞内侧,靠近曲精细管的管腔。常排列成数层。并且多密集 在足细胞游离端的周围。细胞体积更小,胞浆少。胞核呈球形,着色深。 ⑥精子:位于或靠近曲精细管的管腔内。有明显的头和尾,呈蝌蚪状。头部含有核物 质,染色很深,常深入足细胞的顶部胞浆中。尾部朝向管腔。精子发育成熟后脱离曲精细管 的管壁,游离在管腔中,随后进入附睾 精子是一种独特的细胞,不含细胞质。成熟后还有前进运动的能力。 3.精子发生过程( spermatogenesIs)可分为两个明显的时期。第一时期:精细胞生成: 精原细胞经一系列分裂形成精子细胞。第二时期:精子形成( spermiogenesis):精子细胞变 形成为精子 原始生殖细胞在移向胚胎睾丸后,经一系列有丝分裂形成性原细胞。初情期前,性原细 胞分化成A0型精原细胞,为所有其它精原细胞的干细胞。A0、A1和A2精原细胞均沿着曲 精细管基膜排列。A2型精原细胞分裂形成一个休眠(A1型)精原细胞和一个活动的(A3型) 精原细胞。牛和羊的活动型精原细胞经4次有丝分裂,最后形成16个初级精母细胞。 初级精母细胞不久进入成熟分裂的前期,经过中期、后期和末期逐渐完成第一次成熟分 裂,产生两个较小的次级精母细胞。其核内染色体数目减半,这种分裂又称为减数分裂。 几个小时后,次级精母细胞进行第二次成熟分裂,形成两个精子细胞。 精子细胞不再进行分裂,经过一系列复杂的形态变化,即分化为精子 对于绵羊,一个精原细胞的干细胞可以分裂为16个初级精母细胞或64个精子 休眠的A1型精原细胞经有丝分裂,形成A2型精原细胞。这对于精子发生的持续进行非 常重要 随着精子发生的进行,生精细胞逐渐由曲精细管基膜移向管腔 精子发生整个过程的完成,羊需要46~49d:;猪稍短些(36~40d);牛长些(56~63d) (二)母畜卵巢的组织学观察 1.低倍镜观察: 在低倍镜下找出卵巢表面上皮和白膜,区分卵巢的皮质部和髓质部。 (1)表面上皮:位于卵巢皮质的最外层,为单层立方上皮细胞所组成。马卵巢表面上皮
（4）足细胞：又称 Sertoli 细胞、支持细胞、营养细胞。体积较大而细长。但数量较少。 属体细胞。呈辐射状排列在曲精细管中，分散在各期生殖细胞之间，其底部附着在曲精细管 的基膜上，游离端朝向管腔，常有许多各精子嵌在上面。该细胞高低不等，界限不清。细胞 核较大，位于细胞的基部，着色较浅，具有明显的核仁，但不显示分裂现象。由于它的顶端 有数个精子伸入胞浆内，故一般认为此种细胞是对生精细胞起着支持、营养、保护等作用。 足细胞失去功能，精子便不能成熟。 （5）生精细胞（生殖细胞）：数量比较多，成群的分布在足细胞之间，大致排列成 3～ 7 层（同心圆排列）。根据不同发育阶段及其形态特点又可分为：精原细胞、初级精母细胞、 次级精母细胞、精（子）细胞和精子。 ○1 精原细胞：位于最基层，紧贴基膜。细胞体积较小，呈圆形，常有分裂现象。是精子 生成的干细胞。细胞质比较清亮。细胞核大而圆，富含染色质，因而着色较深。 ○2 初级精母细胞：位于精原细胞上面，排成几层，常显示有分裂现象。细胞体积较大， 呈圆形。细胞核呈球形，富有染色质，故着色较深。分裂时，因染色体所处不同的活动时期 而呈线状、棒状或粒状。在最初阶段与精原细胞不易区别。随着细胞离开基膜向管腔移动， 同时胞浆不断增多，胞体不断变大，具有明显的胞核。 ○3 次级精母细胞：位于初级精母细胞的内侧。体积较小。细胞呈圆形。细胞核为球形， 染色质细粒状。由于该细胞很快分裂为两个精子细胞，因而在切片上很难找到它。 ○4 精子细胞：位于精母细胞内侧，靠近曲精细管的管腔。常排列成数层。并且多密集 在足细胞游离端的周围。细胞体积更小，胞浆少。胞核呈球形，着色深。 ○5 精子：位于或靠近曲精细管的管腔内。有明显的头和尾，呈蝌蚪状。头部含有核物 质，染色很深，常深入足细胞的顶部胞浆中。尾部朝向管腔。精子发育成熟后脱离曲精细管 的管壁，游离在管腔中，随后进入附睾。 精子是一种独特的细胞，不含细胞质。成熟后还有前进运动的能力。 3．精子发生过程（spermatogenesis）可分为两个明显的时期。第一时期：精细胞生成： 精原细胞经一系列分裂形成精子细胞。第二时期：精子形成（spermiogenesis）：精子细胞变 形成为精子。 原始生殖细胞在移向胚胎睾丸后，经一系列有丝分裂形成性原细胞。初情期前，性原细 胞分化成 A0 型精原细胞，为所有其它精原细胞的干细胞。A0、A1 和 A2 精原细胞均沿着曲 精细管基膜排列。A2 型精原细胞分裂形成一个休眠（A1 型）精原细胞和一个活动的（A3 型） 精原细胞。牛和羊的活动型精原细胞经 4 次有丝分裂，最后形成 16 个初级精母细胞。 初级精母细胞不久进入成熟分裂的前期，经过中期、后期和末期逐渐完成第一次成熟分 裂，产生两个较小的次级精母细胞。其核内染色体数目减半，这种分裂又称为减数分裂。 几个小时后，次级精母细胞进行第二次成熟分裂，形成两个精子细胞。 精子细胞不再进行分裂，经过一系列复杂的形态变化，即分化为精子。 对于绵羊，一个精原细胞的干细胞可以分裂为 16 个初级精母细胞或 64 个精子。 休眠的 A1 型精原细胞经有丝分裂，形成 A2 型精原细胞。这对于精子发生的持续进行非 常重要。 随着精子发生的进行，生精细胞逐渐由曲精细管基膜移向管腔。 精子发生整个过程的完成，羊需要 46～49d；猪稍短些（36～40d）；牛长些（56～63d）。 （二）母畜卵巢的组织学观察 1．低倍镜观察： 在低倍镜下找出卵巢表面上皮和白膜，区分卵巢的皮质部和髓质部。 （1）表面上皮：位于卵巢皮质的最外层，为单层立方上皮细胞所组成。马卵巢表面上皮
仅分布于排卵窝。其余部分被浆膜覆盖 (2)白膜:位于表面上皮的一薄层致密结缔组织 (3)皮质部:位于白膜下面、卵巢的外周部分(马的则位于卵巢中央靠近排卵窝处)。 由许多大小不等的发育卵泡和闭锁卵泡、少量黄体以及较致密的结缔组织所构成。占卵巢的 大部分,与髓质无明显界限。由于皮质部含有卵泡和产生卵巢激素的细胞,故也称“功能层 (4)髓质部:位于卵巢中央(马则在卵巢周围)。内含有许多细小的血管、神经和富有 弹性纤维的疏松结缔组织 2.高倍镜观察 (1)卵泡发育的观察: 每个卵泡都由位于中央的卵母细胞和围绕在卵母细胞周围的卵泡细胞所组成。有的卵 泡在发育过程中可能退化而形成闭锁卵泡。卵泡可根据发育程度不同而分成下列各期 1)原始卵泡:卵泡呈球形。卵原细胞有丝分裂增殖停止,形成初级卵母细胞。初级卵 母细胞进入第一次减数分裂,然后休止在前期的双线期。初级卵母细胞位于中央,周围包有 一单层扁平的卵泡(颗粒)细胞。卵母细胞的体积比较大,中央有一圆形的泡状核,核内染 色质稀少,着色较浅,核仁明显。卵泡细胞体积小,核扁圆形,着色深。所有的原始卵泡在 出生前就形成了。它处于贮备状态未进入生长。常常在皮质外周成群的出现,称作“卵窝”。 据估计,一头出生牛犊卵巢中央有大约75,000个原始卵泡。 2)初级卵泡:初级卵母细胞迅速生长,外有一层立方形的颗粒细胞包围。此时,卵母 细胞已有透明带形成。并由卵泡颗粒细胞长出绒毛渗透到透明带内,为卵母细胞提供营养 3)次级卵泡:初级卵泡经过发育和生长,即成为次级卵泡。卵母细胞体积基本不变, 但外围的卵泡颗粒细胞生长。卵母细胞由多层颗细胞所包围。其外有卵泡膜形成。 4)三级卵泡:卵泡体积增大。颗粒细胞之间有液体形成并将它们分开,形成卵泡腔 小卵泡腔合并成为大卵泡腔。初级卵母细胞逐渐发育增大,胞浆中卵黄颗粒增多。透明带为 较均一的厚层蛋白质膜。卵泡细胞层增厚。 5)成熟卵泡:也叫 Graafian卵泡。三级卵泡进一步成熟,形成充满卵泡液的水泡,卵 泡突出于卵巢表面。卵泡体积很大。卵泡腔扩大。此时初级卵母细胞长大成熟,核呈空泡状, 染色质很少,核仁明显。胞浆内富有卵黄颗粒。排卵前即恢复并完成第一次减数分裂,结果 形成大小不等的两个细胞,大的细胞为次级卵母细胞,小的叫第一极体。透明带变厚。极体 呈卵圆形,位于透明带与次级卵母细胞之间的卵黄周隙,只要由核质构成,以后逐渐退化 Graafian卵泡的卵泡壁由几个功能细胞层构成。最外层,为有较多纤维细胞层的外膜 向内为内膜层。这两种细胞层由毛细血管网提供血液。外膜与内膜层分界明显,常合称为卵 泡膜。内膜增厚,内膜细胞肥大,呈圆形或多角形,类脂质颗粒增多,细胞核为椭圆形。在 内膜层下面有一层基膜,将内膜与最内层细胞即颗粒细胞层分开。基膜阻止血管系统进入颗 粒细胞层。随着卵泡腔扩大,颗粒细胞层变薄,包围卵泡腔。颗粒细胞排列整齐。有时可见 到细胞分裂 此外,卵丘(颗粒细胞形成的小丘)位于卵泡腔的一侧。卵丘和其它颗粒细胞包裹卵母 细胞。与卵母细胞直接接触的颗粒细胞呈辐射状排列,称作放射冠。排卵开始时。放射冠细 胞与周围的卵泡壁颗粒细胞之间开始出现裂隙,彼此的联系疏松 牛、羊、猪的卵泡在排卵前(马排卵后)完成第一次减数分裂,形成次级卵母细胞。随 即开始第二次减数分裂,然后休止在中期(M)。受精过程才使第二次减数分裂恢复并完成 结果产生合子(受精卵)及第二极体。因而,牛、羊、猪、马等家畜没有真正的卵子存在 6)闭锁卵泡:初级卵泡退化后,一般不留痕迹。但生长卵泡退化时,卵母细胞萎缩, 透明带皱缩塌陷,卵泡液被吸收,卵泡壁凹陷,以后结缔组织侵入泡内 (2)黄体:是排卵后的卵泡转变成的富于血管的内分泌器官。牛、羊、猪的黄体位于
仅分布于排卵窝。其余部分被浆膜覆盖。 （2）白膜：位于表面上皮的一薄层致密结缔组织。 （3）皮质部：位于白膜下面、卵巢的外周部分（马的则位于卵巢中央靠近排卵窝处）。 由许多大小不等的发育卵泡和闭锁卵泡、少量黄体以及较致密的结缔组织所构成。占卵巢的 大部分，与髓质无明显界限。由于皮质部含有卵泡和产生卵巢激素的细胞，故也称“功能层”。 （4）髓质部：位于卵巢中央（马则在卵巢周围）。内含有许多细小的血管、神经和富有 弹性纤维的疏松结缔组织。 2．高倍镜观察： （1）卵泡发育的观察： 每个卵泡都由位于中央的卵母细胞和围绕在卵母细胞周围的卵泡细胞所组成。有的卵 泡在发育过程中可能退化而形成闭锁卵泡。卵泡可根据发育程度不同而分成下列各期。 1）原始卵泡：卵泡呈球形。卵原细胞有丝分裂增殖停止，形成初级卵母细胞。初级卵 母细胞进入第一次减数分裂，然后休止在前期的双线期。初级卵母细胞位于中央，周围包有 一单层扁平的卵泡（颗粒）细胞。卵母细胞的体积比较大，中央有一圆形的泡状核，核内染 色质稀少，着色较浅，核仁明显。卵泡细胞体积小，核扁圆形，着色深。所有的原始卵泡在 出生前就形成了。它处于贮备状态未进入生长。常常在皮质外周成群的出现，称作“卵窝”。 据估计，一头出生牛犊卵巢中央有大约 75，000 个原始卵泡。 2）初级卵泡：初级卵母细胞迅速生长，外有一层立方形的颗粒细胞包围。此时，卵母 细胞已有透明带形成。并由卵泡颗粒细胞长出绒毛渗透到透明带内，为卵母细胞提供营养。 3）次级卵泡：初级卵泡经过发育和生长，即成为次级卵泡。卵母细胞体积基本不变， 但外围的卵泡颗粒细胞生长。卵母细胞由多层颗细胞所包围。其外有卵泡膜形成。 4）三级卵泡：卵泡体积增大。颗粒细胞之间有液体形成并将它们分开，形成卵泡腔。 小卵泡腔合并成为大卵泡腔。初级卵母细胞逐渐发育增大，胞浆中卵黄颗粒增多。透明带为 较均一的厚层蛋白质膜。卵泡细胞层增厚。 5）成熟卵泡：也叫 Graafian 卵泡。三级卵泡进一步成熟，形成充满卵泡液的水泡，卵 泡突出于卵巢表面。卵泡体积很大。卵泡腔扩大。此时初级卵母细胞长大成熟，核呈空泡状， 染色质很少，核仁明显。胞浆内富有卵黄颗粒。排卵前即恢复并完成第一次减数分裂，结果 形成大小不等的两个细胞，大的细胞为次级卵母细胞，小的叫第一极体。透明带变厚。极体 呈卵圆形，位于透明带与次级卵母细胞之间的卵黄周隙，只要由核质构成，以后逐渐退化。 Graafian 卵泡的卵泡壁由几个功能细胞层构成。最外层，为有较多纤维细胞层的外膜； 向内为内膜层。这两种细胞层由毛细血管网提供血液。外膜与内膜层分界明显，常合称为卵 泡膜。内膜增厚，内膜细胞肥大，呈圆形或多角形，类脂质颗粒增多，细胞核为椭圆形。在 内膜层下面有一层基膜，将内膜与最内层细胞即颗粒细胞层分开。基膜阻止血管系统进入颗 粒细胞层。随着卵泡腔扩大，颗粒细胞层变薄，包围卵泡腔。颗粒细胞排列整齐。有时可见 到细胞分裂。 此外，卵丘（颗粒细胞形成的小丘）位于卵泡腔的一侧。卵丘和其它颗粒细胞包裹卵母 细胞。与卵母细胞直接接触的颗粒细胞呈辐射状排列，称作放射冠。排卵开始时。放射冠细 胞与周围的卵泡壁颗粒细胞之间开始出现裂隙，彼此的联系疏松。 牛、羊、猪的卵泡在排卵前（马排卵后）完成第一次减数分裂，形成次级卵母细胞。随 即开始第二次减数分裂，然后休止在中期（M）。受精过程才使第二次减数分裂恢复并完成。 结果产生合子（受精卵）及第二极体。因而，牛、羊、猪、马等家畜没有真正的卵子存在。 6）闭锁卵泡：初级卵泡退化后，一般不留痕迹。但生长卵泡退化时，卵母细胞萎缩， 透明带皱缩塌陷，卵泡液被吸收，卵泡壁凹陷，以后结缔组织侵入泡内。 （2）黄体：是排卵后的卵泡转变成的富于血管的内分泌器官。牛、羊、猪的黄体位于
卵巢皮质浅层突岀于表面。马的黄体则完全埋藏在卵巢深部。根据黄体发育阶段而分成下列 各期。 1)血体期:卵泡破裂后,血液流入卵泡腔内,形成血凝块,也叫红体期。 2)增生期:当破裂卵泡伤口愈合,黄体细胞增生,外观呈黄色。黄体细胞分下列两种: A、粒黄体细胞:来源于卵泡颗粒细胞。多分布于黄体中心,着色浅,呈多角形,体积 较大,胞质出现类脂质颗粒,球形细胞核明显 B、膜黄体细胞:来源于内膜细胞。多分布在黄体边缘或粒黄体细胞之间,体积小,核 及胞质着色较深 3)血管盛开期:血管与结缔组织伸λ黄体中心,形成花彩状,黄体细胞清晰可见 4)成熟期:黄体增大到最高峰,黄体内各种结构明显。 5)白体期:黄体退化、萎缩,变成白色的痕迹 3.输卵管组织学 输卵管从外向内由浆膜、肌层和粘膜三层不同细胞层构成 (1)粘膜:由上皮和固有膜构成。粘膜形成若干初级纵襞,在壶腹内又分出许多次级 纵襞。 上皮:为单层柱状纤毛上皮。其中央为无纤毛的分泌上皮细胞。在漏斗和壶腹部的的上 皮纤毛较高,向子宫逐渐变低。纤毛向子宫端颤动,有助于卵的运送。分泌细胞的分泌物可 供卵的营养 固有膜:由致密的纤维性结缔组织构成。但在壶腹部组织较疏松,伸入皱褶内构成支柱。 (2)肌层:分内环肌和外纵肌两层。两侧之间无明显界限。靠近子宫端的肌层较厚 伞部的外纵肌消失,仅含有分散的肌细胞 (3)浆膜:为输卵管壁最外层。浆膜基本上为结缔组织。在肌层和浆膜之间有很宽的 层疏松结缔组织,叫浆膜下层,其中含有卵巢和子宫血管的分支、淋巴管、神经和纵行平 滑肌。 4.子宫组织学 子宫壁分为三层:内膜、肌层和外膜。 (1)内膜:由上皮和固有膜构成 上皮:为单层的柱状上皮。细胞有时有纤毛。无纤毛的细胞有分泌性质。上皮陷入固有 膜内,形成子宫腺 固有膜:又叫内膜基质。为环形的结缔组织,纤维较细,还有网状纤维和网状细胞,之 间有各种白细胞和巨噬细胞、淋巴管、血管和子宫腺。 子宫腺是弯曲的分支管状腺。管壁由单层柱状上皮构成,多为分泌粘液的细胞,纤毛细 胞较少。管壁外有分层的结缔组织鞘 (2)肌层:分厚的内环肌和薄的外纵肌,在内外肌层之间为血管层,其中有神经分布 (3)外膜:为浆膜,由疏松结缔组织和间皮组成。 四、作业 1.绘出并注明睾丸曲精细管及其所含细胞的构造图 2.绘出并注明卵巢组织结构及卵泡发育各阶段示意图
卵巢皮质浅层突出于表面。马的黄体则完全埋藏在卵巢深部。根据黄体发育阶段而分成下列 各期。 1）血体期：卵泡破裂后，血液流入卵泡腔内，形成血凝块，也叫红体期。 2）增生期：当破裂卵泡伤口愈合，黄体细胞增生，外观呈黄色。黄体细胞分下列两种： A、粒黄体细胞：来源于卵泡颗粒细胞。多分布于黄体中心，着色浅，呈多角形，体积 较大，胞质出现类脂质颗粒，球形细胞核明显。 B、膜黄体细胞：来源于内膜细胞。多分布在黄体边缘或粒黄体细胞之间，体积小，核 及胞质着色较深。 3）血管盛开期：血管与结缔组织伸入黄体中心，形成花彩状，黄体细胞清晰可见。 4）成熟期：黄体增大到最高峰，黄体内各种结构明显。 5）白体期：黄体退化、萎缩，变成白色的痕迹。 3．输卵管组织学 输卵管从外向内由浆膜、肌层和粘膜三层不同细胞层构成。 （1）粘膜：由上皮和固有膜构成。粘膜形成若干初级纵襞，在壶腹内又分出许多次级 纵襞。 上皮：为单层柱状纤毛上皮。其中央为无纤毛的分泌上皮细胞。在漏斗和壶腹部的的上 皮纤毛较高，向子宫逐渐变低。纤毛向子宫端颤动，有助于卵的运送。分泌细胞的分泌物可 供卵的营养。 固有膜：由致密的纤维性结缔组织构成。但在壶腹部组织较疏松，伸入皱褶内构成支柱。 （2）肌层：分内环肌和外纵肌两层。两侧之间无明显界限。靠近子宫端的肌层较厚。 伞部的外纵肌消失，仅含有分散的肌细胞。 （3）浆膜：为输卵管壁最外层。浆膜基本上为结缔组织。在肌层和浆膜之间有很宽的 一层疏松结缔组织，叫浆膜下层，其中含有卵巢和子宫血管的分支、淋巴管、神经和纵行平 滑肌。 4．子宫组织学 子宫壁分为三层：内膜、肌层和外膜。 （1）内膜：由上皮和固有膜构成。 上皮：为单层的柱状上皮。细胞有时有纤毛。无纤毛的细胞有分泌性质。上皮陷入固有 膜内，形成子宫腺。 固有膜：又叫内膜基质。为环形的结缔组织，纤维较细，还有网状纤维和网状细胞，之 间有各种白细胞和巨噬细胞、淋巴管、血管和子宫腺。 子宫腺是弯曲的分支管状腺。管壁由单层柱状上皮构成，多为分泌粘液的细胞，纤毛细 胞较少。管壁外有分层的结缔组织鞘。 （2）肌层：分厚的内环肌和薄的外纵肌，在内外肌层之间为血管层，其中有神经分布。 （3）外膜：为浆膜，由疏松结缔组织和间皮组成。 四、作业： 1．绘出并注明睾丸曲精细管及其所含细胞的构造图。 2．绘出并注明卵巢组织结构及卵泡发育各阶段示意图
实验三孕马血清促性腺激素(PMSG)效价的生物测定 、目的和要求 PMSG是由马(驴)的子宫内膜杯状细胞所分泌的一种糖蛋白激素。兼有促卵泡素(FSH) 和促黄体(LH)双重生物学活性,但以FSH活性为主。母马在怀孕40天左右在血液中出 现。170天左右消失。本实验的目的在于:1)用生物学方法测定妊娠母马血清中的PMSG 的含量,用生物学单位来判定其效价。2)校验商品PMSG生物制剂的生物效价。 通过实验要求学生熟练掌握PMSG生物测定方法。为将来进行家畜繁殖方面的科研、 教学和畜牧生产实践应用打下基础。 二、实验原理 某一激素对靶器官起作用,靶器官产生特定的生理反应。PMSG能促进动物卵泡发育成 熟,引起发情和排卵,也能引起卵巢和子宫的发育。以小白鼠子宫发育增大为测定活性的根 据,测得该激素引起小白鼠子宫阳性反应的最低有效浓度,从而计算样品的活性效价,即为 该样品的PMSG的小白鼠单位/毫升(MU/ml) 三、材料 (一)实验动物:选择同品系的、20~21日龄(未到性成熟,阴门未开张)体重未10~ 12g的雌性健康小白鼠90只。小白鼠只数可因人多少而变动 (二)测试样品:PMSG生物制剂或孕马血清 (三)器械及药品:lm注射器、4号针头、10m注射器及9号针头、lml和2ml吸管 酒精棉球、碘酒棉球、生理盐水、大小镊子、外科剪、鼠解剖板、搪瓷盘、试管架、10或 20ml试管或试剂瓶 四、方法和步骤 1.测试组的确定:为使效价的测定精确,应先将各测试样品浓度组距加大进行粗测 以测得样品较为精确的效价 2.小白鼠分组:将小白鼠随机分成六组,每组10只。分别编号。其中一组为对照。其 余小鼠为备用。根据学生人数分成相应的组进行实验。 3.PMSG的稀释:用生理盐水先将PMSG制剂稀释20倍,作为工作液。然后再用生 理盐水将工作液稀释成含PMSG不同的浓度组(见附表1)。 该浓度使根据预测样品中激素效价的大致范围而设计的组间距离 4.注射:每组学生分别就其中一种浓度的PMSG给本组的10只小白鼠进行注射。其 中5只小白鼠做颈背部皮下注射,另外5只做腹腔内注射,剂量为0.2ml/只。对照组用相 同方法注射等量的生理盐水 注射方法:1)颈部皮下注射法。用手指捏住小鼠的头及尾部进行固定。用酒精棉球消 毒其颈背部。提起皮肤,将连在1m注射器上的4号针头平插刺入皮下,将针头微向上挑
实验三 孕马血清促性腺激素（PMSG）效价的生物测定 一、目的和要求 PMSG 是由马（驴）的子宫内膜杯状细胞所分泌的一种糖蛋白激素。兼有促卵泡素（FSH） 和促黄体（LH）双重生物学活性，但以 FSH 活性为主。母马在怀孕 40 天左右在血液中出 现。170 天左右消失。本实验的目的在于：1）用生物学方法测定妊娠母马血清中的 PMSG 的含量，用生物学单位来判定其效价。2）校验商品 PMSG 生物制剂的生物效价。 通过实验要求学生熟练掌握 PMSG 生物测定方法。为将来进行家畜繁殖方面的科研、 教学和畜牧生产实践应用打下基础。 二、实验原理 某一激素对靶器官起作用，靶器官产生特定的生理反应。PMSG 能促进动物卵泡发育成 熟，引起发情和排卵，也能引起卵巢和子宫的发育。以小白鼠子宫发育增大为测定活性的根 据，测得该激素引起小白鼠子宫阳性反应的最低有效浓度，从而计算样品的活性效价，即为 该样品的 PMSG 的小白鼠单位／毫升（MU/ml）。 三、材料 （一）实验动物：选择同品系的、20～21 日龄（未到性成熟，阴门未开张）、体重未 10～ 12g 的雌性健康小白鼠 90 只。小白鼠只数可因人多少而变动。 （二）测试样品：PMSG 生物制剂或孕马血清。 （三）器械及药品：1ml 注射器、4 号针头、10ml 注射器及 9 号针头、1ml 和 2ml 吸管、 酒精棉球、碘酒棉球、生理盐水、大小镊子、外科剪、鼠解剖板、搪瓷盘、试管架、10 或 20ml 试管或试剂瓶。 四、方法和步骤 1．测试组的确定：为使效价的测定精确，应先将各测试样品浓度组距加大进行粗测， 以测得样品较为精确的效价。 2．小白鼠分组：将小白鼠随机分成六组，每组 10 只。分别编号。其中一组为对照。其 余小鼠为备用。根据学生人数分成相应的组进行实验。 3．PMSG 的稀释：用生理盐水先将 PMSG 制剂稀释 20 倍，作为工作液。然后再用生 理盐水将工作液稀释成含 PMSG 不同的浓度组（见附表 1）。 该浓度使根据预测样品中激素效价的大致范围而设计的组间距离。 4．注射：每组学生分别就其中一种浓度的 PMSG 给本组的 10 只小白鼠进行注射。其 中 5 只小白鼠做颈背部皮下注射，另外 5 只做腹腔内注射，剂量为 0.2ml／只。对照组用相 同方法注射等量的生理盐水。 注射方法：1）颈部皮下注射法。用手指捏住小鼠的头及尾部进行固定。用酒精棉球消 毒其颈背部。提起皮肤，将连在 1ml 注射器上的 4 号针头平插刺入皮下，将针头微向上挑
起但不露出针尖,再注入药物。随着药物的推入,在皮下可见到鼓起一个小泡,表明药物已 注入皮下部位。凡注射部位有外渗的小鼠必须淘汰,换鼠重新注射。2)腹腔内注射法。操 作者一只手固定小鼠,另一只手注射。用酒精棉球消毒腹部,然后在阴部前方平行进针,再 与腹中线呈45度角刺入腹部,缓缓注入药物,注射后针头应逐步退出。注射完毕,小鼠放 置在相同条件下饲养。 5.剖检:注射药物后72~76h,采用颈椎脱臼法处死小白鼠。然后将小鼠固定在解剖 板上,用外科剪剪开腹腔。找到子宫,拨开其它器官,直接观察子宫增大情况。也可将子宫 卵巢剥离取出,观察子宫增大情况。凡比对照组子宫增大一倍或一倍以上者为阳性反应。并 做好记录,记下每组反应的只数。 6.效价确定:某一浓度使5只小白鼠子宫为阴性反应时,表明该样品所含的实际效价 低于该组的小白鼠单位。某一浓度使5只小白鼠子宫全部呈阳性反应时,表明该样品所含的 实际效价高于该组的小白鼠单位。当阳性反应数递减到只有3只小白鼠的一组,定为最低有 效浓度组。将该组稀释浓度的分母乘以5(因为每只小白鼠注射0.2ml,计算lml样品中的 小白鼠单位即乘以5),其乘积即为待测PMSG的活性效价,以MUml表示 五、实验注意事项 1.进行生物测定时,应选纯系小白鼠(至少时纯种小白鼠) 2.剂量要准确。稀释时一定要摇匀 3.所用试管、鼠笼摇及时作好标记 4.对照组小白鼠子宫粗细不一时,应选择平均粗度的子宫进行比较。 5.按要求进行小白鼠的饲养管理 六、作业 根据解剖结果,计算出测定样品中每毫升所含的PMSG小白鼠单位
起但不露出针尖，再注入药物。随着药物的推入，在皮下可见到鼓起一个小泡，表明药物已 注入皮下部位。凡注射部位有外渗的小鼠必须淘汰，换鼠重新注射。2）腹腔内注射法。操 作者一只手固定小鼠，另一只手注射。用酒精棉球消毒腹部，然后在阴部前方平行进针，再 与腹中线呈 45 度角刺入腹部，缓缓注入药物，注射后针头应逐步退出。注射完毕，小鼠放 置在相同条件下饲养。 5．剖检：注射药物后 72 ～76h，采用颈椎脱臼法处死小白鼠。然后将小鼠固定在解剖 板上，用外科剪剪开腹腔。找到子宫，拨开其它器官，直接观察子宫增大情况。也可将子宫 卵巢剥离取出，观察子宫增大情况。凡比对照组子宫增大一倍或一倍以上者为阳性反应。并 做好记录，记下每组反应的只数。 6．效价确定：某一浓度使 5 只小白鼠子宫为阴性反应时，表明该样品所含的实际效价 低于该组的小白鼠单位。某一浓度使 5 只小白鼠子宫全部呈阳性反应时，表明该样品所含的 实际效价高于该组的小白鼠单位。当阳性反应数递减到只有 3 只小白鼠的一组，定为最低有 效浓度组。将该组稀释浓度的分母乘以 5（因为每只小白鼠注射 0.2ml，计算 1ml 样品中的 小白鼠单位即乘以 5），其乘积即为待测 PMSG 的活性效价，以 MU/ml 表示。 五、实验注意事项 1．进行生物测定时，应选纯系小白鼠（至少时纯种小白鼠）。 2．剂量要准确。稀释时一定要摇匀。 3．所用试管、鼠笼摇及时作好标记。 4．对照组小白鼠子宫粗细不一时，应选择平均粗度的子宫进行比较。 5．按要求进行小白鼠的饲养管理。 六、作业： 根据解剖结果，计算出测定样品中每毫升所含的 PMSG 小白鼠单位