流程 抗原 细胞融合 脾细胞 HAT抵抗的) 针分泌型骨细 胞(HAT感的 HNT中培养 三三条死脾胞深渐 骨髓瘤细胞被HAT 死亡,只有融合细 小LLLL 胞存活 检测抗体阳性孔 克降抗体产牛细胞
流 程
培养液 >RPM1640培养液 DMEM培养液
➢RPM1640培养液 ➢DMEM培养液 培 养 液
细胞融合剂 >PEG:分子量4000的PEG是最常用的细胞融合 剂 >作用机理:诱导细胞膜上脂类物质结构重排,使 细胞膜易打开而有助于细胞融合 >作用特点:随机发生的,不同厂商、批号、分子 量的PEG,其纯度与毒性有所不同
➢PEG:分子量4000 的PEG是最常用的细胞融合 剂 ➢作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使 细胞膜易打开而有助于细胞融合 ➢作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子 量的PEG，其纯度与毒性有所不同 细胞融合剂
HGPR酶与IK酶 次黄嘌呤磷酸核糖转化酶 >胸腺嘧啶核苷激酶
➢次黄嘌呤磷酸核糖转化酶 ➢胸腺嘧啶核苷激酶 HGPRT酶与TK酶
HAT培养基 >H(H hypoxanthine ):次黄嘌呤 >A( Aminopterin):氨基喋呤;叶酸拮 抗物,阻断DNA合成主要途径 T( Thymidine):胸腺嘧啶核苷;“核苷 酸前体”,供细胞通过替代途径合成DNA
➢H（Hypoxanthine）:次黄嘌呤 ➢A（Aminopterin）：氨基喋呤；叶酸拮 抗物，阻断DNA合成主要途径 ➢T (Thymidine)：胸腺嘧啶核苷； “核苷 酸前体”，供细胞通过替代途径合成DNA HAT培养基