《遗传学》课程教学资源（PPT课件讲稿）第十一章 遗传的分子基础（基因重组和基因工程 Genetic Recombination and Genetic Engineering）

4.遗传工程 口广义遗传工程包括: 生化工程、蛋白质工程、细胞工程、染色体 工程、细胞器工程、基因工程及酶工程等。 口狭义遗传工程是指 基因工程(重组DNA技术)

 广义遗传工程包括: 生化工程、蛋白质工程、细胞工程、染色体 工程、细胞器工程、基因工程及酶工程等。  狭义遗传工程是指: 基因工程(重组DNA技术)。 4.遗传工程

第二节 重组DNA技术 DNA Recombination Technique

第 二 节 重组DNA技术 DNA Recombination Technique

(一)工具酶 口限制性核酸內切酶 口DNA聚合酶 口逆转录酶 口T4DNA连接酶 口碱性磷酸酶 口末端转移酶 口7 ag dna聚合酶

（一）工具酶  限制性核酸内切酶  DNA聚合酶Ⅰ  逆转录酶  T4DNA连接酶  碱性磷酸酶  末端转移酶  Taq DNA聚合酶

重组DNA技术中常用的工具酶 王工具酶 功 限制性核酸内切酶识别特异序列,切割DNA DNA连接酶催化DNA中相邻的5磷酸基和3羟基末端之间形成磷酸二 酯键,使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接 DNA聚合酶I①合成双链cDNA分子或片段连接 ②缺口平移制作高比活探针 ③DNA序列分析 ④填补3′末端 Klenow片段又名DNA聚合酶大片段,具有完整DNA聚合酶的5→3聚 合、3′→>5′外切活性,而无5′→3'外切活性。常用于cDNA第 三链合成,双链DNA3末端标记等 反转录酶 ①合成cDNA ②替代DNA聚合酶Ⅰ进行填补,标记或DNA序列分析 多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5′羟基末端磷酸化,或标记探针 末端转移酶在3’羟基末端进行同质多聚物加尾 碱性磷酸酶—切除末端磷酸基

重组DNA技术中常用的工具酶 工 具 酶 功 能 限制性核酸内切酶 识别特异序列，切割DNA DNA连接酶 催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸二 酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接 DNA聚合酶Ⅰ ①合成双链cDNA分子或片段连接 ②缺口平移制作高比活探针 ③DNA序列分析 ④填补3´末端 Klenow片段 又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的5→3聚 合、3→5外切活性，而无5→3外切活性。常用于cDNA第 二链合成，双链DNA 3末端标记等 反转录酶 ①合成cDNA ②替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化，或标记探针 末端转移酶 在3´羟基末端进行同质多聚物加尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基

限制性核酸內切酶 定义 限制性核酸內切酶( restriction endonuc lease,RE)是识别DNA的特异序列,并在 识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 Bamh I GGATCC G+GATCG CCTAGG CCTAG G

限制性核酸内切酶 定义 限制性核酸内切酶 (restriction endonuclease, RE)是识别DNA的特异序列, 并在 识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ