λ噬菌体感染大肠杆菌的途径 A噬菌体、ADN A LOOo 88 ⊙ I DNA 进入细胞 A噬菌体 活性 E coli DNA 细菌细胞 ADNA整合到E.col基因组
噬菌体感染大肠杆菌的途径
DNA重组体的筛选 ●载体特征的直接筛选 菌落的原位杂交 免疫学方法
DNA重组体的筛选 • 载体特征的直接筛选 • 菌落的原位杂交 • 免疫学方法
如果外源DNA 如果外源DNA 插入,氨卞青霉 EcoRI 亲抗性基因失活 BamhI 插入,四环景抗性 基因失活 PstI 氨苄青霉素 四环素 抗性基因 抗性基因 (ampR) (ter R) 复制起点 pBR322质粒结构
pBR322质粒结构 如果外源DNA 插入，氨卞青霉 素抗性基因失活 如果外源DNA 插入，四环素抗性 基因失活
复印至硝酸 纤维素膜上 用NaOH菌体裂 细菌菌落 解DNA变性 单链DNA结 °。合到膜上 32P-CDNA 杂交 放射自显影 原位杂交法筛选 DNA重组体图解 与放射性cDNA杂 交的菌落的斑点
原位杂交法筛选 DNA重组体图解 复印至硝酸 纤维素膜上 用NaOH菌体裂 解DNA变性 杂交 放射自显影 32P-cDNA 与放射性cDNA杂 交的菌落的斑点 细菌菌落 单链DNA结 合到膜上
限制性酶切割 限制片段 Southern 印迹法 DNA分子 琼脂糖电泳 带有DNA片 ///l// 段的凝胶 用缓冲液,转移至硝酸纤维素膜上 转移 DNA 凝胶 滤膜 与放射性标记 DNA探针杂交 吸附有DN 片段的膜 放射自显影 ///Nn///
Southern 印迹法 DNA分子 限制性酶切割 限制片段 琼脂糖电泳 转移至硝酸纤维素膜上 与放射性标记 DNA探针杂交 放射自显影 带有DNA片 段的凝胶 凝胶 滤膜 用缓冲液 转移 DNA 吸附有DNA 片段的膜