胚胎干细胞的形态学特征 核浆比高 √体外培养呈集落性生长,无明显细胞界限
胚胎干细胞的形态学特征 ✓ 核浆比高 ✓ 体外培养呈集落性生长，无明显细胞界限
胚胎干细胞的生物学特性 ˇ具高端粒酶基因活性,可在体外无限扩增——永生 化( immortal 维持稳定的、正常的二倍体染色体结构 √表达早期胚胎细胞特异性标记基因,如:AP,Oct4 √多系分化能力(体内外)及种系传递能力 是体外进行遗传操作(基因敲除、标记等)的理想 细胞模型
胚胎干细胞的生物学特性 ✓ 具高端粒酶基因活性，可在体外无限扩增——永生 化 （immortal） ✓ 维持稳定的、正常的二倍体染色体结构 ✓ 表达早期胚胎细胞特异性标记基因，如：AP, Oct4 ✓ 多系分化能力（体内/外）及种系传递能力 ✓ 是体外进行遗传操作（基因敲除、标记等）的理想 细胞模型
Table 1 I The best-characterized ESc markers* Undifferentiated state marker Mouse Human cell-surface and nuclear antigens o0 SSEA1+ SSEA3/4+ TRA1-60/815 TRA2-54 GCTM-2s TG343s TG30 aE8,o0u552A CD9l CD133/prominin OCT4 NANOG ??+++++ SOX2 Enzymatic activities In vitro culture requirements Feeder-cell dependent LIF dependent GF4 +++ Growth characteristics Ability to form trophoblast Teratoma formation in vivo Growth characteristics in vitro Form tight, rounded, Form flat, loose multi-layer clumps aggregates; can can form EBs form EBs Ability to form germ cells in vitro
➢ Mouse and human ESC - comparison
Mouse Esc: DMEM, FBS/KSR(15-20%), LIF (10 ng/ml), GlutaMAX(2mM), Sodium pyruvate(1mM), NEAA (O1mM), B-mercaptoethanol(0. 1mM) Human Esc: DMEM, FBS/KSR(15-20%), bFGF (4 ng/ml), GlutaMAX (2mM), Sodium pyruvate(1mM) NEAA (0.1mM), B-mercaptoethanol(0.1 mM
Mouse ESC: DMEM, FBS/KSR (15~20%), LIF (10 ng/ml), GlutaMAX (2mM), Sodium pyruvate (1mM), NEAA (0.1mM), β-mercaptoethanol (0.1mM ) Human ESC: DMEM, FBS/KSR (15~20%), bFGF (4 ng/ml), GlutaMAX (2mM), Sodium pyruvate (1mM), NEAA (0.1mM), β-mercaptoethanol (0.1mM )
胚胎干细胞的生物学特性 √永生化( immortal);具高端粒酶基因活性,可 在体外无限扩增 维持稳定的、正常的二倍体染色体结构 √表达早期胚胎细胞特异性标记基因,如:AP,Oct4 √多系分化能力(体内你)及种系传递能力 是体外进行遗传操作(基因敲除、标记等)的理想 细胞模型
胚胎干细胞的生物学特性 ✓ 永生化 （immortal）；具高端粒酶基因活性，可 在体外无限扩增 ✓ 维持稳定的、正常的二倍体染色体结构 ✓ 表达早期胚胎细胞特异性标记基因，如：AP, Oct4 ✓ 多系分化能力（体内/外）及种系传递能力 ✓ 是体外进行遗传操作（基因敲除、标记等）的理想 细胞模型