天津中医焉大学 现代中菊分析实验讲义 (供中药专业使用) 天津中医药大学中药学院 分析化学教研室 2015年4月
1 天津中医药大学 现代中药分析实验讲义 （供中药专业使用） 天津中医药大学中药学院 分析化学教研室 2015 年 4 月
目录 实验项目一:加味香连丸的TLC鉴别 实验项目二:紫外分光光度法测定加味香连丸中黄连生物碱的含量 实验项目三:复方丹参滴丸中龙脑的含量测定 实验项目四:中药制剂中橙皮苷的含量测定 35689 实验项目五:HPLC综合实验一一清颗粒测定(1) 实验项目六:HPC综合实验一一清颗粒测定(2)
2 目 录 实验项目一：加味香连丸的 TLC 鉴别..........................................................................3 实验项目二：紫外分光光度法测定加味香连丸中黄连生物碱的含量 .....................5 实验项目三：复方丹参滴丸中龙脑的含量测定...........................................................6 实验项目四：中药制剂中橙皮苷的含量测定 ...............................................................8 实验项目五：HPLC 综合实验—一清颗粒测定(1).......................................................9 实验项目六：HPLC 综合实验—一清颗粒测定(2).....................................................12
天津中医药大学 《现代中药分析》实验讲义 所属课程 现代中药分析核心课程学时36 适用专业 中药学1004中药制药1005 课程英文名称 Analysis of Chinese Medicinal Preparation Experiment 一、实验课程简介 《中药制剂分析》是一门以中医药理论为指导,运用现代分析理论和方法研 究中药制剂质量的综合应用性学科,是中药专业的核心主干课程之 二、实验课程目标 通过实验,加深对中药制剂分析基本理论、基本知识的理解,正确、熟练地 掌握中药制剂分析常用的法定方法及规范化的操作技能。 《现代中药分析实验》是《化学分析》、《仪器分析》、《中药学》、《方剂学》 《中药炮制》、《中药鉴定学》、《中药化学》和《中药制剂学》等相结合的一门具 有很强实践性和综合性的应用科学。本课程实践教学既注重基本技能训练、又加 强创新能力的培养。在实践教学内容的安排上,既有验证性实验,让学生掌握药 物分析的一般方法与技术特点;又有综合性试验,使学生将理论知识和具体的药 物分析测定技术融会贯通,掌握解决实际药物分析技术问题的方法;还包括设计 性试验,培养学生的硏究创新能力。验证性、综合性和设计性试验分步骤逐步实 施,使学生的理论和实验技能得到不断的进步。 三、实验项目 (一)实验项目一:加味香连丸的TLC鉴别 1、实验项目学时:6学时 实验项目类型:验证性、综合性实验 3、实验项目内容:1.加味香连丸中黄连总碱的提取;黄连药味的薄层鉴别。 2.加味香连丸中挥发油的提取;药味的薄层鉴别 4、实验项目学习要求:(从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求) (1)运用知识:中药材及其复方制剂的TLC鉴别、中药有效部位的提取、 对照液、供试液制备。TLC基本操作技能练习
3 天津中医药大学 《现代中药分析》实验讲义 所属课程 现代中药分析 核心课程 学时 36 适用专业 中药学 1004 中药制药 1005 课程英文名称 Analysis of Chinese Medicinal Preparation Experiment 一、实验课程简介 《中药制剂分析》是一门以中医药理论为指导，运用现代分析理论和方法研 究中药制剂质量的综合应用性学科，是中药专业的核心主干课程之一。 二、实验课程目标 通过实验，加深对中药制剂分析基本理论、基本知识的理解，正确、熟练地 掌握中药制剂分析常用的法定方法及规范化的操作技能。 《现代中药分析实验》是《化学分析》、《仪器分析》、《中药学》、《方剂学》、 《中药炮制》、《中药鉴定学》、《中药化学》和《中药制剂学》等相结合的一门具 有很强实践性和综合性的应用科学。本课程实践教学既注重基本技能训练、又加 强创新能力的培养。在实践教学内容的安排上，既有验证性实验，让学生掌握药 物分析的一般方法与技术特点；又有综合性试验，使学生将理论知识和具体的药 物分析测定技术融会贯通，掌握解决实际药物分析技术问题的方法；还包括设计 性试验，培养学生的研究创新能力。验证性、综合性和设计性试验分步骤逐步实 施，使学生的理论和实验技能得到不断的进步。 三、实验项目 （一）实验项目一：加味香连丸的 TLC 鉴别 1、实验项目学时：6 学时 2、实验项目类型：验证性、综合性实验。 3、实验项目内容：1．加味香连丸中黄连总碱的提取；黄连药味的薄层鉴别。 2. 加味香连丸中挥发油的提取；药味的薄层鉴别。 4、实验项目学习要求：（从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求） （1）运用知识：中药材及其复方制剂的 TLC 鉴别、中药有效部位的提取、 对照液、供试液制备。TLC 基本操作技能练习
(2)提髙能力:掌握中药提取、净化操作;5种TLC溶液配制操作;TLC 规范操作;鉴别中药真伪操作技能。提髙TC法鉴别中药的能力及有效部位提 取能力。 5、主要仪器设备与材料: 千分之一天平、恒温水浴锅、层析缸、三用紫外分析仪、喷雾瓶、吹风机、 加味香连丸、盐酸小檗碱对照品、黄连及木香对照药材,95%乙醇(AR)。 6、与理论课程的关系:本实验是在第二章鉴别基础知识教学基础上的实验教 学。是中药鉴别主要方法的直接应用。是中国药典的最主要方法。 7、实验步骤 1)取本品60mg,研细,加乙醇5ml,置水浴中加热回流15分钟,滤过, 滤液补加乙醇使成5ml,作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg,同法制成 对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加乙醇制成每lm含0.04mg的溶液 照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各2微升,分别点于同一硅胶G薄层板 上,以乙酸乙酯:氯仿:甲醇:氨水:二乙胺(8:2:2:1:0.5)为展开剂 展开,取出,晾干,置紫外光灯(365m)下检视。供试品色谱中,在与对照药 材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光斑点;在与对照品色谱相应的位置上 显相同的一个黄色荧光斑点。 2)取本品0.5g,研细,加乙醚5ml,放置2小时,时时振摇,滤过,滤液 挥去乙醚,残渣加醋酸乙酯0.5n使溶解,作为供试品溶液。另取木香对照药材 02g,加乙醚5nl,同法制成对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种 溶液各2微升,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷:丙酮(10:3)为展 开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃烘约5分钟。供 试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的紫红色至蓝紫色斑点 8、数据处理:给出鉴定结论 如实记录画出薄层板(黄连及木香) 9、思考题: 1)定性鉴别需配置哪几种溶液?为什么? 2)定性鉴别对量有哪些要求?
4 （2）提高能力：掌握中药提取、净化操作；5 种 TLC 溶液配制操作；TLC 规范操作；鉴别中药真伪操作技能。提高 TLC 法鉴别中药的能力及有效部位提 取能力。 5、主要仪器设备与材料： 千分之一天平、恒温水浴锅、层析缸、三用紫外分析仪、喷雾瓶、吹风机、 加味香连丸、盐酸小檗碱对照品、黄连及木香对照药材，95%乙醇（AR）。 6、与理论课程的关系：本实验是在第二章鉴别基础知识教学基础上的实验教 学。是中药鉴别主要方法的直接应用。是中国药典的最主要方法。 7、实验步骤 1）取本品 60mg，研细，加乙醇 5ml，置水浴中加热回流 15 分钟，滤过， 滤液补加乙醇使成 5ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材 50mg，同法制成 对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每 1ml 含 0.04mg 的溶液。 照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各 2 微升，分别点于同一硅胶 G 薄层板 上，以乙酸乙酯：氯仿：甲醇：氨水：二乙胺（8：2：2：1：0.5）为展开剂， 展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药 材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的一个黄色荧光斑点。 2）取本品 0.5g，研细，加乙醚 5ml，放置 2 小时，时时振摇，滤过，滤液 挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯 0.5ml 使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材 0.2g，加乙醚 5ml，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种 溶液各 2 微升，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以环己烷：丙酮（10：3）为展 开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，在 105℃烘约 5 分钟。供 试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色至蓝紫色斑点。 8、数据处理：给出鉴定结论 如实记录,画出薄层板(黄连及木香) 9、思考题： 1）定性鉴别需配置哪几种溶液？为什么？ 2）定性鉴别对量有哪些要求？
(二)实验项目二:紫外分光光度法测定加味香连丸中黄连生物碱的含量 l、实验项目学时:6学时 2、实验项目类型:验证性、综合性实验。 3、实验项目内容:1.利用氧化铝色谱柱净化加味香连丸中黄连生物碱 利用紫外紫外分光光度法测定黄连总生物碱含量 4、实验项目学习要求:(从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求) (1)运用知识:掌握用柱层析净化提取物的方法;掌握紫外分光光度法测 定复方中某一类物质的方法 (2)提髙能力:掌握中药提取、净浄化操作;UVⅥS规范操作;提高UVVS 法测定中药成分含量的能力。 主要仪器设备与材料 1.紫外-可见分光光度计 2.小层析柱:高13cm,内径8mm,2个 3.中性A2O3(150200目) 4.样品:加味香连丸 5.对照品:盐酸小檗碱 6、与理论课程的关系:本实验是在第四单元含量测定基础知识教学基础上的 实验教学。是UVⅥS法测定中药成分含量方法的直接应用。是中国药典的主要 方法。 7、实验步骤 1)含量测定: A、样品溶液配制: 取加味香连丸0.5g,研成细粉,精密称取0.1g实验中称取多少写多少, 置60n索氏提取器中加95%乙醇40ml连续回流提取生物碱至无色。将提取液 浓缩至20ml,定量转移到25m容量瓶中,用95%乙醇至刻度 精密吸取样品液1.0ml通过AlO3柱,用95%EtOH至洗脱完全,收集洗脱液于10m 容量瓶中,连续加95%乙醇至刻度,于λmax350nm处测定吸收度。 B、对照品溶液配制 用95%乙醇溶液,配制对照品溶液浓度为0.006mg/ml
5 （二）实验项目二：紫外分光光度法测定加味香连丸中黄连生物碱的含量 1、实验项目学时：6 学时 2、实验项目类型：验证性、综合性实验。 3、实验项目内容：1．利用氧化铝色谱柱净化加味香连丸中黄连生物碱 2．利用紫外紫外分光光度法测定黄连总生物碱含量 4、实验项目学习要求：（从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求） （1）运用知识：掌握用柱层析净化提取物的方法；掌握紫外分光光度法测 定复方中某一类物质的方法。 （2）提高能力：掌握中药提取、净化操作；UV-VIS 规范操作；提高 UV-VIS 法测定中药成分含量的能力。 5、主要仪器设备与材料： 1．紫外-可见分光光度计 2．小层析柱：高 13 cm，内径 8 mm，2 个 3．中性 Al2O3（150—200 目） 4．样品：加味香连丸 5．对照品：盐酸小檗碱 6、与理论课程的关系：本实验是在第四单元含量测定基础知识教学基础上的 实验教学。是 UV-VIS 法测定中药成分含量方法的直接应用。是中国药典的主要 方法。 7、实验步骤 1）含量测定： A、样品溶液配制： 取加味香连丸 0.5g，研成细粉，精密称取 0.1g(实验中称取多少写多少)， 置 60ml 索氏提取器中加 95%乙醇 40ml 连续回流提取生物碱至无色。将提取液 浓缩至 20ml，定量转移到 25ml 容量瓶中，用 95%乙醇至刻度. 精密吸取样品液1.0ml通过 Al2O3柱,用95%EtOH至洗脱完全，收集洗脱液于10ml 容量瓶中，连续加 95%乙醇至刻度，于 λmax350nm 处测定吸收度。 B、对照品溶液配制 用 95%乙醇溶液，配制对照品溶液浓度为 0.006mg/ml