第二节细胞组分的分析方法 ●离心分离技术 ●细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ●特异蛋自抗原的定位与定性 ●细胞内特异核酸的定位与定性 ●放射自显影技术 ●定量细胞化学分析技术
16 第二节 细胞组分的分析方法 z离心分离技术 z细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 z特异蛋白抗原的定位与定性 z细胞内特异核酸的定位与定性 z放射自显影技术 z定量细胞化学分析技术
离心分离技术 ●用途:于分离细胞器与生物大分子及其复合物 ●差速离心:分离密度不同的细胞组分 ●密度梯度离心:精细组分或生物大分子的分离
17 一、 离心分离技术 z用途：于分离细胞器与生物大分子及其复合物 z差速离心 ：分离密度不同的细胞组分 z密度梯度离心 ：精细组分或生物大分子的分离
二、细胞内核酸、蛋白质 酶、糖与脂类等的显示方法 ●原理:利用一些显色剂与所检测物质中一些 特殊基团特异性结合的特征,通过显色剂在细胞 中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中 的分布和含量
18 二、 细胞内核酸、蛋白质、 酶、糖与脂类等的显示方法 z原理： 利用一些显色剂与所检测物质中一些 特殊基团特异性结合的特征，通过显色剂在细胞 中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中 的分布和含量
特异蛋白抗原的定位与定性 ●免疫荧光技术 快速、灵敏、有特异性,但其分辨率有限(图) ●免疫电镜技术 ◆免疫铁蛋白技术 ◆免疫酶标技术 ◆免疫胶体金技术 应用:通过对分泌蛋白的定位,可以确定某种蛋白的分泌动态;胞内酶 的研究;膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等 ●蛋白电泳 (SDS-PAGE) 与免疫印迹反应( (Western-Blot)□
19 三、特异蛋白抗原的定位与定性 z免疫荧光技术： 快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 （ 图 ） z免疫电镜技术： ¡免疫铁蛋白技术 ¡免疫酶标技术 ¡免疫胶体金技术 应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶 的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等 z蛋白电泳(SDS-PAGE) 与免疫印迹反应(Western-Blot)
四、细胞内特异核酸的定位与定性 ◆光镜水平的原位杂交技术 (同位素标记或荧光素标记的探针) ◆电镜水平的原位杂交技术 (生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合) ◆PCR技术
20 四、细胞内特异核酸的定位与定性 ¡光镜水平的原位杂交技术 （同位素标记或荧光素标记的探针） ¡电镜水平的原位杂交技术 （生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合） ¡PCR技术